QN4050 葡聚糖凝胶G-100

葡聚糖凝胶G-100由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科学研究，我公司专注于分离试剂类产品的研发、生产和供应，为您提供的葡聚糖凝胶G-100质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括葡聚糖凝胶G-100在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：葡聚糖凝胶G-100
英文名称：Sephadex G-100 medium
产品货号：QN4050
产品规格：25g|100g|500g

葡聚糖凝胶G-100利用分子筛作用，进行多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定。

葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。另外，粗级也可用于批量工艺。

葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖昔键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

葡聚糖疑胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。

性   状：白色微球，多孔
凝胶类型：凝胶过滤填料，亲水型凝胶
结构成分：交联右旋糖酐
粒   径：40～120µm
工作PH值：2～10
操作温度：4～40℃
球蛋白分离范围：4000～150000
保存条件：4～25℃

使用方法：
1．葡聚糖凝胶预处理：
  在室温下，将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，或者用蒸馏水煮沸至少1小时直至充分溶胀，凝胶体积不再变化。
  注：在溶胀前，加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降，沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多，需要重复多次漂洗将其除去，防止层析时阻塞凝胶柱，影响流速。
2．装柱：
  将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层; 装柱要均匀，可在凝胶耐受的操作压下装柱，装好的凝胶柱可以检测柱效，检测过滤柱装填是否合格。
  凝胶层析分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度：分级分离时，一般需要100cm左右长的层析柱，柱高与直径之比为20:1-100:1，柱高过高时，凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压，应当尽可能避免；分组分离（例如脱盐）时用短柱，柱高控制在40-50cm以下，柱高与直径的比约为5:1-10:1。
3．平衡：
  上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；
4．上样：
  分级分离时上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积。
  样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去，样品的粘度不能过高，否则影响分离效果。
5．洗脱方法：
  可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；
6．在位清洗(CIP)
  凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。 方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向清洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
7．保存
  凝胶柱暂时不用，可将其回收，一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干，可加入0.02%叠氮化钠防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生长。

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货号：QN4065
规格：10ml
谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.用于分离纯化谷胱甘肽S-转移酶（GST）标签蛋白、其它来源的谷胱甘肽S-转移酶以及和谷胱甘肽具有亲和作用的蛋白的亲和层析介质。pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。

产品参数：
基质：6%琼脂糖凝胶
配基：肝素
颗粒大小：45～165μm
zuì大流速：600cm/h
工作pH：pH3.0～pH12.0
每毫升蛋白结合量：10mg
操作温度：室温
保存条件：贮存于4℃～28℃（保存溶液为20%乙醇）

使用方法：
1．谷胱甘肽树脂的处理：
① 轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
② 取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
③ 4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
④ 在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
⑤ 每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。
2．制备细胞抽提物：
① 每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
② 加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
③ 用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
3．纯化融合蛋白：
① 细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
② 混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
③ 沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
④ 4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
⑤ 结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
4．用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
① 沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
② 4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
③ 重复步骤5和6两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
④ 在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。
⑤ 4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
⑥ 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。
  试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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