YT511 RNase H

RNase H由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，我公司的RNase H品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括RNase H在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNase H
英文名称：Ribonuclease H
产品货号：YT511
产品规格：100U

本酶是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。

特点：特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。
用途：DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除mRNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。
来源：E.coli MRE-600细胞。
分子量：约18.4kDa(单体)。
活性定义：37℃20分钟内，能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl2，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
酶储存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl2，10mM DTT。
失活或抑制：65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. DNA-RNA杂合链中去除RNA：
a. 用反转录酶，例如RT M-MuLV反转录酶或RT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：
Reaction Buffer (10X)————2µl
无核酸酶去离子水——————217.8µl
RNase H (5U/µl)——————20.2µl
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 37℃孵育1小时。
e. 加入2.5µl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。
说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。

2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
a. 用反转录酶，例如RT M-MuLV反转录酶(YT392)、RT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(YT393)或cDNA 链合成试剂盒(RNase H-)(YT395)合成cDNA条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成条链的20µl反应体系中依次加入如下试剂：
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I————8µl
无核酸酶去离子水—————————————————68.8µl
RNase H (5U/µl)—————————————————0.2µl
DNA Polymerase I, E.coli—————————————3µl (30U)
c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃)
e. 加入5µl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。
注：Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl2，10mM DTT。

3. 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。

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货号	名称	规格
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名称：DNase I溶液
货号：BTN130984
规格：1.5mL
本产品是DNase I的10mg/mL的溶液，酶活性为1500-2500U/mg。DNase I从牛胰腺纯化得到是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶，分子量约32kDa(单体)。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5´端为磷酸基团，3´端为羟基。其活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。

产品特点：
1．即开即用，不需要用户单独配置。
2．可用于制备RNase-free的DNase。本产品为粗制品，可能含残留的RNase，不能直接用于清除RNA样品中的DNA。
3．本产品可直接用于DNase I Footprinting实验、缺口平移(Nick Translation)、制备DNA随机片断文库、制备TUNEL检测中的阳性对照。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
本产品可用于DNase I Footprinting实验、缺口平移(Nick Translation)、制备DNA随机片断文库、TUNEL检测中剪切基因组DNA作为阳性对照。具体使用方法请参考相关资料。

注意：本产品浓度较高，如需对其进行稀释，需要自备DNase I储存液。

DNase I储存液的配方：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl₂，50%(v/v)甘油。

附录：
1．DNase I活性定义：37℃10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
2．DNase I活性检测条件：40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl2，1μg of pBR322 DNA。
3．纯度：不含其它DNA内切酶和外切酶。
4．DNase I酶储存溶液：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v)甘油。
5．DNase I酶反应液(10×)：100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl2，1mM CaCl2。
6．失活或抑制：加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚lǜ仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子、0.1%的SDS、DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。

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