WH0053 RNA纯化试剂盒

RNA纯化试剂盒的品牌是百奥莱博，是优质的RNA提取纯化产品，本制品用于生化实验研究等领域，本品质量稳定，价位合理，需要RNA纯化试剂盒等RNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括RNA纯化试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNA纯化试剂盒
英文名称：RNA Purification Kit
产品货号：WH0053
产品规格：20次

本试剂盒用于从酶反应液（如DNase处理、蛋白酶处理、RNA标记等）中纯化回收RNA，也可用于从其它方式提取获得的RNA的纯化。纯化的总RNA无蛋白质污染，所得的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot、mRNA提取、cDNA合成、引物延伸、差异显示等。

本试剂盒使用独特的离心吸附柱，在高盐条件下RNA与硅胶吸附膜、专一地结合，同时zuì大限度除去蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等，在低盐条件下，RNA被洗脱。可处理的RNA样品量为20μg。

操作流程：


试剂盒组成：

组分	50T
溶液RK	10ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O	15ml
RNase-Free吸附柱CR2（含2ml收集管)	20套
RNase-Free离心管（1.5ml)	20个

保存条件：室温（15-25℃)可保存1年。

预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用RNase-Free的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在本制品中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用RNase-Free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V，放置过夜，高压灭菌）。

操作步骤：
次使用前在RK中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1ml RK中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液zuì好现用现配。配好的RK 4℃可放置一个月，溶液RK在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
以下步骤建议在冰浴中进行。

1．在RNA样品中加入RNase-Free水补足至100 μl，加入350 μl溶液RK（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），充分混匀。
2．加入250 μl无水乙醇，充分混匀，立即进行下一步。
3．将上一步所得溶液和沉淀一起转入吸附柱CR2中，12000rpm离心30 sec，弃掉收集管中的废液。
4．向吸附柱CR2中加入500 μl漂洗液RW（请先检查是否已加入乙醇），室温放置2 min后，12000rpm离心30 sec，弃废液，将CR2放入收集管中。
5．重复操作步骤4。
6．12000rpm离心5 min，去除残余液体。
7．将吸附柱CR2转入一个新离心管中，加14-20 μl RNase-Free水，室温放置2 min后，12000rpm离心2 min。
  洗脱缓冲液体积不应少于14 μl，体积过小影响回收效率。
  洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且RNA产物应保存在-20℃，以防RNA降解。
8．要提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。

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名称：水样病毒沉淀剂
货号：BTN101118
规格：10次

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货号：BTN3070
规格：100mL
本试剂盒是类似于TRIzol、基于异硫氰酸胍/酚/氯fǎng提取原理的快速总RNA提取试剂，可用于从各种动物组织(包括白细胞)和部分植物材料中快速提取总RNA。

产品特点：
1. 操作简单快速，只要10分钟左右，可以全在室温下进行。
2. RNA 质量高，OD260/OD280一般在1.9左右。一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
3.适用于大部分实验材料，如培养细胞、各种动物材料和少数植物材料。植物RNA的提取zuì好使用植物RNA提取试剂盒。
4. 高于进口TRIzol和TRI Reagent等同类产品。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：下面的操作步骤是用1mL 本产品进行的微量提取的，细胞使用量一定要准确，不能超过下述用量，否则将超出本产品的裂解能力，RNA产量将急剧降低。如果样品量大，请按比例增加各成份的用量。RNA 工作环境zuì好用的固相RNase清除剂(BTN3080)彻底处理。
1. 对贴壁细胞(10 平方厘米)：吸尽培养液，加入1mL的本产品用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移至干净的1.5mL塑料离心管中，进入第6 步。
2. 对悬浮细胞(五百万至一千万个)：离心收集细胞，吸尽液体，加入1mL本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中，进入第6 步。
3. 对新鲜组织(50-100mg)：将新鲜组织剪切成小块，放入10mL或15mL塑料离心管中，加入1mL的本产品，用Polytron 剪切式匀浆器冰上匀浆30秒左右，将匀浆液转移至新的1.5mL塑料离心管中，进入第6步。注意：对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，使用量不要超过30-50mg，否则十分容易产生DNA污染。对10mg以下的组织，zuì好加入本公司的微量RNA 助沉剂。
4. 对RNAhold 保存的组织(50-100mg)：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同第3 步。RNAhold处理后的组织韧性很强，匀浆时间需要适当延长。
5. 对液氮中保存的组织(50-100mg)：在研钵中研磨成粉，加入1mL 本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中，进入第6 步。
6.在装有裂解物/匀浆物的1.5mL塑料离心管中加入0.2mL自备氯fǎng，振荡器上充分振荡混均30秒。注意：一定要把官底的溶液震荡起来，否则只是液面的振动。
7. 13000-15000g室温离心3分钟。
8. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下50-100μl上清液不取。
9. 对脂类丰富的组织(如脂肪组织和脑组织)，需再重复氯fǎng抽提一到两次以让氯fǎng充分去除脂类分子。
10.在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡30秒混匀。
11. 13000-15000g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果组织使用量低于10mg或需要提高RNA 回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
12.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
13.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡混匀30秒。
14. 13000-15000g室温离心1分钟。
15.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
16. 重复第13-15的洗涤步骤一次(也可以省略)。
17. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃RNA
沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的后续使用。
18.室温放1-2分钟后立即加入50-100μl RNase-free 水使RNA沉淀溶解。
千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA 将变得十分难溶。RNA样品可以立即使用或存放于-80℃待用。
注意：由于RNase-free 水没有主动灭活残留RNase的功能，而任何方法提取的RNA 都可能有残留的RNase，所以强烈建议客户使用本公司推出的具有主动灭活残留RNase 功能的、同时跟后续RT-PCR等反应兼容的液相RNase 清除剂(BTN3091)。

附一：RNA 完整性的电泳检测(仅供参考，本产品不含相关试剂)
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE缓冲液或超快核酸电泳液进行常规电泳，但文献报道必须使用RNAload这样的变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以zuì好不要使用，否则RNA容易降解。
动物RNA电泳后应该在UV下呈现三条清晰的rRNA 带，28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA 条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
跟动物一样，植物果实和种子的RNA一般有三条电泳带，但植物叶片的RNA 有四条或更多rRNA带，多余的RNA 来源于叶绿体。
如果电泳发现RNA样品中有DNA污染(一般是使用过多样品造成)，可分别用非酶DNA 清除剂或RNase-free DNase 清除。

附二：RNA产量和纯度测定(仅供参考，本产品不含相关试剂)
用pH在7.5-8.2的TE缓冲液将5-10μL RNA稀释10-20倍后在OD260和OD260测光吸收，通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。RNA的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而不同，一般来说，代谢旺盛的组织(如肝脏和肾脏)RNA的产率高，代谢不旺盛的组织(如肌肉和脂肪组织)RNA的产率低，下面是常见动物组织的RNA产率:
肌肉，胎盘和脑组织: 1-2μg RNA/mg 组织
肝，胰和肾组织: 5-10μg RNA/mg 组织
培养细胞: 5-15μg/10E6细胞
RNA的纯度通过OD260/OD280 来确定，一般在1.8-2.1之间即算合格。但即使低于此范围，一般也不会影响RT-PCR等反应。
蛋白质污染可以通过酚/氯fǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，多糖污染可以用多糖清除剂去除。

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