WH0037 高纯度质粒微量提取试剂盒

高纯度质粒微量提取试剂盒是高品质的DNA提取纯化产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要高纯度质粒微量提取试剂盒等DNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括高纯度质粒微量提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高纯度质粒微量提取试剂盒
英文名称：High Purity Plasmid micro Extraction Kit
产品货号：WH0037
产品规格：50次

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有材料，、专一吸附DNA。由于增加了过滤柱，与普通的提取方法相比，本试剂盒可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，适用于提取1-5ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接等实验。

产品特点：
·高纯度：提取的质粒DNA可直接用于转染等高要求实验。
·快速：步骤少，操作简单，节省时间。
·：可提取菌体85%以上质粒DNA。

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率	质粒
高拷贝质粒	1-5ml	6-30μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒	1-5ml	3-12μg	pBR322,pACYC及其衍生载体pSC101 及其衍生载体，SuperCos,pWE15

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	15ml
溶液P2	15ml
溶液P3	20ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	150μl
过滤柱CS	50个
吸附柱CP3	50个
收集管（2ml)	100个

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．注意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g)。
5．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
6．实验前使用平衡液处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
7．用平衡液处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．取1-5ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm （~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3．向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
  注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4．向离心管中加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5.向离心管中加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm （~13400×g )离心10min，用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS（过滤柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。
  注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6．12000rpm （~13400×g )离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀，尽量的吸取上清）。
7．12000rpm （~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
8．向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
9．向吸附柱CP3中加入600 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
10．重复操作步骤9。
11．将吸附柱CP3放入收集管中，12000rpm （~13400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
12．将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min，将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤12。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

低拷贝或大质粒（>10 kb）提取：
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。

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名称：土壤腐殖酸清除剂
货号：BTN70603
规格：250mL
土壤和湖海沉积物中都含有棕黑色或黑色的腐殖酸，它们对PCR等后续反应有大的抑制作用，所以有效去除土壤中腐殖酸是提取土壤微生物DNA的重要环节。但是目前市场上没有专门的产品，针对这一情况，百奥莱博开发了本产品，专门用于对提取DNA用的土壤进行预处理，以清除腐殖酸成分。

产品特点：
1. 清除效果好，一次能使腐殖酸的浓度降低50%左右。
2.适合于黄色、红色、黑色和棕黑色等各种质地的土壤和河海沉积物。
3. 操作过程简单快速，一次处理只需要10分钟。
4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用及效果：
按每1克土壤加10mL本产的比例将样品混合，振荡3～5分钟，3000-5000g室温离心5分钟，弃上清，沉淀可直接用于DNA提取。此操作可以多次重复。

图注：比较水和本产品处理泥碳(腐殖酸含量大于60%)样品的效果，C为用水处理后离心得到的结果，1-5是同一土壤样品用本产品洗涤1-5后所得到的上清液。

图注：用我司土壤DNA提取试剂(BTN60701)提取泥碳样品所得到的DNA溶液，1号样品所用土壤预先用水洗涤过三次，2号样品预先用本产品洗涤过三次。

名称：痰液采集器
货号：BTN130938
规格：1个

名称：土壤基因组提取试剂盒
货号：WE0187
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤、湿泥、淤泥及海河沉淀物中提取总DNA。本产品使用安全方便，单个样品操作一般可在40分钟内完成。使用本品每克土壤可获得5μg以上的DNA，片段长度主要在20-30 kb之间。本试剂盒采用独特的溶液能够有效去除杂质和腐殖酸，通过优化的缓冲系统使裂解液中的DNA结合到吸附柱上，土壤中残留的杂质、PCR和酶反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤有效去除，zuì后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer SW	60ml
Buffer SL	30ml
Buffer GLS	30ml
Buffer PR(浓缩液)	13ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇，70%乙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2、次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PR、GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GLS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer SL和Buffer GLS于56℃水浴重新溶解。

操作步骤：
1、取0.1 g-0.3 g土壤样本，置于离心管(自备)中，加入1ml Buffer SW，涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来)。12000rpm(～13400×g)离心1分钟，倒掉上清。
2、加入750μl的70%乙醇，涡旋振荡1分钟(须将管底的土壤震起来)，12000rpm离心1分钟，倒掉上清，用移液器将余液吸尽。
3、向沉淀中加入500μl Buffer SL，涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来)，65℃水浴20分钟(可每隔5分钟涡旋振荡5秒)，12000rpm离心3分钟，将上清移至新的离心管(自备)中。
4、向上清液中加等体积Buffer GLS，颠倒混匀15-25次，冰上放置5分钟。12000rpm离心5分钟。
注意：冰上放置后液体可能会凝结，属正常现象。
5、将步骤4中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱DM中，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：若一次不能加完溶液，可分多次转入。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer PR(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水，室温放置 2-5分钟， 12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于100μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中微量的残余腐殖酸可能对PCR反应产生不良影响。此时将DNA稀释5-100倍问题通常即可解决。如经稀释后的DNA仍不能有效应用于PCR反应， 请使用腐殖酸清除剂，以获得更的清除效果。

储存条件：室温(15～30℃)。

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