WH0069 Taq Plus DNA聚合酶

北京百奥莱博供应的Taq Plus DNA聚合酶用于科研试验，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多Taq Plus DNA聚合酶等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括Taq Plus DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Taq Plus DNA聚合酶
英文名称：Taq Plus DNA Polymerase
产品货号：WH0069
产品规格：250U|500U

本制品是Taq和Pfu DNA聚合酶的混合物，有5′-3′外切核酸酶活性和3′-5′外切酶活性。Taq Plus具备扩增效率高，错配率低的特点。与Taq DNA聚合酶相比，具有扩增长度增加（简单模板可有效扩增长达20 kb，对复杂模板也可达10 kb）、保真度好等优点；与Pfu DNA聚合酶比较，具有扩增速度快，反应效率高的。PCR产物可直接进行T/A载体克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化，加A后再进行T/A载体克隆。用于从复杂模板中如基因组等扩增高保真产物，如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析（SNP）等。

产品组成：

组分	WH0069-1	WH0069-2
Taq Plus DNA Polymerase	250U	500 U
10×Taq Plus Buffer	1.8ml	1.8ml

10×Taq Plus Buffer
200mM Tris-HCl （pH 9.0);200mM KCl;100mM （NH4)2SO4;15 mM MgCl2;其它成分。
10×Taq Plus Buffer分为含Mg2+和不含Mg2+两种，可自选。不含Mg2+的Buffer，另外配有25 mM MgCl2。如果没有特别，通常提供的为含有Mg2+的Buffer。

储存条件：-20℃保存

活性定义：
1单位（U）HotMaster Taq DNA polymerase活力定义为在74℃、30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10nmol的脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：
SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

使用举例：
注意：以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定zuì佳反应条件。以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段
1．PCR反应体系的建立，50μl体系如下（可根据比例放大或缩小体系)：

组份	体积
Template	＜1μg
Primer 1（10μM)	1 μl
Primer 2（10μM)	1 μl
10×Taq Plus Buffer	5 μl
dNTP Mixture（2.5 mM)	4 μl
Taq Plus（2.5 U/μl)	0.5-1 μl
ddH2O	补至50μl

2．PCR反应循环的设置：
  
3．结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

根据您的关注的Taq Plus DNA聚合酶，Taq酶&Pfu酶，您可能还对以下产品有需求：



名称：PCR抑制物清除剂
货号：BTN60804
规格：1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用，使DNA 能够用于PCR扩增。

产品特点：
1. 使用简单，直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广，可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品按1：10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR，如果PCR反应体系为50μL，则需要加本产品5μL。

名称：通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒
货号：BTN101114
规格：50次
本试剂盒可以用于RT-LAMP等温扩增，RT-LAMP即逆转录和Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增)的结合，专门用于快速扩增RNA。LAMP是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4或6条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于RT-PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点：
1.高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比RT-PCR更高。
2.高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的RNA分子
3. 65℃左右完成RT和LAMP扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板RNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

试剂盒组成：

成分	规格
RT-LAMP Mix(2×)	0.5ml
AMV-Bst混合液	75μl
对照引物混合物	40μl
对照模板	5μl
MgCl2(25mM)	0.2ml
RNase-free水	1ml
说明书	1份

注：RT-LAMP Mix(2×)稀释到1×时，已经有8mM Mg2+，本试剂盒提供的MgCl2(25mM)用于用户优化条件用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
RT-LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
自备FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备模板 RNA	1-100ng	不加
AMV-Bst 混合液	1.5μl	1.5μl
补水到	20μl	20μl

 注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL)，则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则zuì好保温120分钟；如果使用Loop引物，则zuì好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。此酶有外切酶活性，所以必须灭活。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。
5. 结果分析：
a)如果没有扩增，则需要用本试剂提供的阳性对照进行扩增。本试剂盒提供阳性对照，反应按下表设置：

成份	阳性对照管
RT-LAMP Mix(2×)	10μl
对照引物混合物	4.0μl
对照模板	1μl
AMV-Bst 混合液	1.5μl
水	3.5μl

 混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以zuì好保温120分钟。
b)如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家联系。

注意事项：
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成10.浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。

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货号	名称	规格
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