KFS318 XTT细菌增殖及细菌毒性检测试剂

XTT细菌增殖及细菌毒性检测试剂由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要XTT细菌增殖及细菌毒性检测试剂等细胞凋亡与增殖产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括XTT细菌增殖及细菌毒性检测试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：XTT细菌增殖及细菌毒性检测试剂
英文名称：XTT Bacteria Proliferation and Cytotoxicity Kit
产品货号：KFS318
产品规格：500T|1000T

XTT(二甲氧唑黄)是一种类似于MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，活细菌线粒体中存在与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶，可将黄色的XTT 还原成水溶性的橘黄色的甲月赞。生成的甲臜能够溶解在组织培养基中，不形成颗粒，可直接用酶联免疫检测仪检测定吸光值。

注意事项
1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
2. 如果待测溶液有还原性，测定不含细菌，但含有XTT 的待测溶液在450 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入XTT ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细菌两次，然后加入新的100 μl 培养基和20 μl XTT 工作液进行检测。
3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。
4. 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法
1. 96 孔板加入细菌100μL/孔（约1×104），置37℃ 5%CO2 细菌培养箱培养24 小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96 孔板在37℃，含5% CO2 空气及湿度的细菌培养箱中孵育适当时间。
4. 向各孔中加入20 μl 的XTT 工作液。
5. 37℃下孵育1~4 小时。
6. 酶标仪在450nm 波长处检测每孔的光密度。

结果分析
1. 细菌的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（完全培养基加XTT 工作液，无细菌）或空白药物孔OD 值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加XTT 工作液，无细菌），各重复孔的OD 值取均数±SD。细菌的存活率以T/C%表示，T 为加药细菌的OD 值，C 为对照细菌的OD 值。细菌存活率% =（加药细菌OD/对照细菌OD）×100
2. 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。

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本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3 为关键的执行分子，与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3 由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，zuì终导致细胞凋亡。Caspase-3 荧光检测试剂盒就是将caspase-3 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当底物被Caspase-3 剪切后，发色基团即游离出来，可通过荧光酶标仪测定其荧光强度（激发波长=485nm,发射波长=535nm）。

注意事项
1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-3 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg，以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求，因为Caspase-3 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的RFU 值偏低，可以通过适当延长反应的时间，如果值还是不高，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

名称：细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
货号：SY0470
规格：50T|100T
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡的分析。

碘化丙啶 (Propidium，PI) 是一种双链DNA荧光染料，其嵌入双链DNA后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，根据DNA含量的分布情况，进行细胞周期和细胞凋亡分析。

PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化 (DNA fragmentation) 导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。 细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期，染色质皱缩，细胞密度增加，前向角光散射色显著降低。凋亡后期，细胞产生凋亡小体，前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

注意事项

1）本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。
2）细胞处理需轻柔，尽量避免人为的损伤细胞。
3）为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验细胞应处于对数生长期，贴壁细胞一般在50～80%汇合度时收集为宜。
4）400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，留下单细胞，否则会出现人为的多倍体干扰。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞轻弹以分散，再进行染色。
5）荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

储存条件：-20℃，避光

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