YT454 Rb荧光素酶报告基因质粒

Rb荧光素酶报告基因质粒的品牌是百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，本制品用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要Rb荧光素酶报告基因质粒等克隆与表达产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括Rb荧光素酶报告基因质粒(Rb抑癌基因质粒)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Rb荧光素酶报告基因质粒(Rb抑癌基因质粒)
英文名称：Rb-luc Reporter gene plasmid
产品货号：YT454
产品规格：1μg

Rb报告基因质粒是用于检测Rb(retinoblastoma protein)转录抑制活性水平的报告基因质粒。Rb质粒是以pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个Rb结合位点，可以高灵敏度地检测Rb的转录抑制活性水平。Rb可以和E2F等转录因子结合，抑制这些转录因子的激活，抑制细胞周期的进展。Rb同时也可以作为一个抑制性转录因子直接结合到其响应的顺式作用元件，抑制该基因的转录。

pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到zuì低。

Rb质粒的主要信息如下：

base pairs	5677
Rb response element	32-91
Minimal TA promoter (pTA)	114-136
luc2 reporter gene	178-1830
SV40 late poly(A) signal	1865-2086
SV40 early enhancer/promoter	2134-2552
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region	2577-3371
Synthetic poly(A) signal	3396-3444
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3511-3530
ColE1-derived plasmid replication origin	3768
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4559-5419
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5524-5677
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5626-5645

Rb质粒的图谱如下：



使用说明：
1. 次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. Rb质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。

储存条件：-20℃。

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名称：单细胞裂解液(RNA提取)
货号：BTN130804
规格：1mL
本产品为单细胞RNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定含有常用。纯化所得RNA可用于测序、单细胞PCR等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：DNA去磷酸化试剂盒
货号：BTN130828
规格：20次
分子克隆时，载体的自连大降低了连接效率，而对载体DNA 两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5′端标记前，也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。

产品特点：
1.基于细菌碱性磷酸酶，反应在较高温度进行，效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团，丧失连接能力。
3. 模板可以是单链，也可以是双链，既可以是DNA，也可以是RNA。
4.处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20次去磷酸化实验。

试剂盒组成

成分	规格
10×去磷酸缓冲液	100μl
细菌碱性磷酸酶(0.5U/μL)	50μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：
注意：dNTP和ATP 也是碱性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。

1、在微量离心管中配制下列反应液(50μL)：

成分	用量
DNA片段	不超过10pmol
10×去磷酸缓冲液	5μl
细菌碱性磷酸酶	2.5μl
超纯水到	50μl

2、65℃反应30分钟。如果是RNA样品，建议在37℃反应30分钟。
3、酚氯fǎng抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用(见附)。

附：酚/氯fǎng抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超纯水增加体积，以免纯化过程中DNA 丢失。如果有必须，可以加入和4μL 核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL 酚/氯fǎng/异戊醇25：24：1 混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。
3、重复上步操作一次。
4、加0.1倍体积(即10μL)的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍体积(即250μL)的无水乙醇。
6、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
8、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
9、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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