BTN90605B TdT加尾法DNA生物素标记试剂

TdT加尾法DNA生物素标记试剂由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，TdT加尾法DNA生物素标记试剂是我司众多优质探针标记及检测之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒
英文名称：TdT-Tailing DNA Labeling Kit
产品货号：BTN90605B
产品规格：5次

本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3′突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和dì高辛标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带dì高辛标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
TdT缓冲液，5×	20μl
TdT(末端转移酶，10U/μL)	10μl
dATP，2mM	5μl
标记核苷酸	(A、B、C不同，见注)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μl体系的标记反应(如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度)：

成份	用量
探针DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4μl
标记核苷酸，1mM (A型需自备标记核苷酸)	1μl
dATP，2mM	(见下注)
TdT末端转移酶(10U/μL)	2μl
超纯水	补到20μl

注：dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定zuì佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长)；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已)，每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/lǜ仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。

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名称：酵母tRNA溶液(粗提)
货号：BTN70904A
规格：1.5mL
本产品分粗体液和精提液两种类型，浓度均为5mg/mL。A是酵母tRNA粗提液，用作制备更高纯度(如分子生物级)酵母tRNA的原材料。B是精提液，是经过本公司柱式RNAadsorp纯化的分子生物学级别的酵母tRNA溶液，不含蛋白质和DNA污染，OD260/OD280在1.9左右，可直接用作微量RNA提取和回收的助沉剂，也可以用作原位杂交、Northern杂交的封堵剂，对于探针为RNA的杂交试验尤其适用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：以tRNA粗提液(BTN70904A)为材料，酚法制备tRNA精提液(BTN70904B)
1.在1倍体积的tRNA粗提液中加入一倍体积的自备Tris饱和酚，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
2.在上清中再加入一倍体积的自备Tris饱和酚和0.2倍体积自备的lǜ仿，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要2-4次抽提。
4.在上清中加入0.1倍体积的自备3M NaAc(pH5.2)和2倍体积的自备无水乙醇，振荡混匀。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL自备 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体，所得沉淀即是精提的酵母tRNA，可以溶解在自备的DEPC水中，UV测定其浓度，然后直接用于各种分子生物学实验。
注意：tRNA比较短，又是单链，所以电泳时结合EB等染料的能力很弱，测定其浓度时zuì好不要使用电泳比较法，而要使用分光光度法。
注意：此法得率较高，但缺点是不能去除部分多糖污染，因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果zuì后得到的溶液带颜色，则需要用本公司柱式RNAadsorp精提，详细过程见该产品使用说明书。

二：tRNA精提液(BTN70904B)作为核酸助沉剂
1.在核酸(DNA或/和RNA)溶液中，加入适当浓度的盐离子，盐离子不同其终浓度也不相同，具体如下：

盐	终浓度
NH4OAc(醋酸铵)	0.5M
NaCl(氯化钠)	0.25M
NaOAc(醋酸钠)	0.3M

2. 加入本产品使其终浓度为20μg/mL，混合均匀。
3. 加入两倍体积的乙醇，混合均匀。
4. 冰上放置15分钟。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体。
8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。
注：由于tRNA是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物，因此如果回收的DNA或RNA要用于此类反应，就不能使用tRNA作为助沉剂。如果回收的RNA要用于RT-PCR，使用tRNA可能会对反应的特异性产生干扰。

三：tRNA精提液(BTN70904B)作为杂交封堵剂
本产品可以作为原位杂交、Northern杂交和RNA斑点杂交的封堵剂，也可以作为Southern杂交和DNA 斑点杂交的封堵剂，但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为100μg/mL。
如果使用RNA探针，zuì好使用本产品做封堵剂，以保护RNA探针。

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