QN4106 葡聚糖凝胶G-25

葡聚糖凝胶G-25由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多葡聚糖凝胶G-25等分离试剂类产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括葡聚糖凝胶G-25在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：葡聚糖凝胶G-25
英文名称：Sephadex G-25 medium
产品货号：QN4106
产品规格：25g|100g|500g

葡聚糖凝胶G-25利用分子筛作用，进行缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子;工业脱盐。球蛋白分离范围1000～5000。

葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。另外，粗级也可用于批量工艺。

葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖昔键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

葡聚糖疑胶并不熔融，可以在湿态、中性pH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。

技术参数：
性   状：白色微球，多孔
凝胶类型：凝胶过滤填料，亲水型凝胶
结构成分：交联右旋糖酐
粒   径：细颗粒20～80µm，中颗粒50～150µm，粗颗粒100～300µm
工作PH值：2～13
操作温度：4～40℃
球蛋白分离范围：1000～5000
保存条件：4～25℃

使用方法：
1．葡聚糖凝胶预处理：
在室温下，将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，或者用蒸馏水煮沸至少1小时直至充分溶胀，凝胶体积不再变化。
注：在溶胀前，加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降，沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多，需要重复多次漂洗将其除去，防止层析时阻塞凝胶柱，影响流速。
2．装柱：
将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层; 装柱要均匀，可在凝胶耐受的操作压下装柱，装好的凝胶柱可以检测柱效，检测过滤柱装填是否合格。
凝胶层析分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度：分级分离时，一般需要100cm左右长的层析柱，柱高与直径之比为20～100:1，柱高过高时，凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压，应当尽可能避免；分组分离（例如脱盐）时用短柱，柱高控制在40～50cm以下，柱高与直径的比约为5～10:1。
3．平衡：
上样前用平衡液平衡层析柱至少3～5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；
4．上样：
分级分离时上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1～2%的床体积，视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积。
样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去，样品的粘度不能过高，否则影响分离效果。
5．洗脱方法:
可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；
6．在位清洗(CIP)
凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向清洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
7．保存
凝胶柱暂时不用，可将其回收，一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干，可加入0.02%叠氮化钠防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生长。

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名称：GST标签纯化树脂
货号：QN4045
规格：5ml|10ml
pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。

别名：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B
粒度：45-165µm
流速：75cm/h          
工作pH：4～10
耐压：0.3Mpa
载量：＞5mg谷胱甘肽S-转移酶
储存条件：4℃保存，有效期至少一年。

使用说明：
谷胱甘肽树脂的处理：
1．轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2．取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
3．4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
4．在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
5．每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。制备细胞抽提物：
6．每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
7．加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
8．用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白：
9．细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
10．混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
11．沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
12．4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
13．重复步骤11和12两次。
14．结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
16．4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
17．重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定时间。
19．4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
20．10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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