WH0206 单索引接头（Illumina)

单索引接头（Illumina)由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，单索引接头（Illumina)是我司众多优质基因结构和功能之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括单索引接头（Illumina)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：单索引接头（Illumina)
英文名称：Single-Indexed Adapter
产品货号：WH0206
产品规格：12×40μl|12×40μl|24×40μl

本制品是专门针对于illimina高通量测序平台所开发的DNA接头。可用于illimina高通量测序平台下DNA和RNA文库的构建。试剂盒分为12种接头和24种接头两种形式，每种接头均含有的6碱基index序列（barcode），以便于在多样品混合测序时进行不同样品的区分。

本制品提供的接头浓度为30μM，操作时的用法随着建库所用试剂盒、初始DNA处理量和DNA片段大小的不同而不同，具体信息请参考使用方法。另外，24种接头的Index序列详见接头序列信息部分。

产品特点：
·选择方便：分为setA和SetB两组提供24种单Index标记，可根据需求自由选择。
·使用方便：试剂盒中配备接头稀释液，稳定性强，直接用于接头溶液稀释。
·质量控制：批次间经严格质量控制和功能验证，保证index序列准确性。

适用范围：
1．本产品在二代测序（NGS）应用中，用于illimina高通量测序平台下DNA和RNA文库的构建；
2．本产品的具体应用包括：外显子测序，靶向测序，RNA-Seq，ChIP-Seq，以及定向测序和全基因组测序；
3．需要注意的是，本产品不适用于Illumina HiSeq XTM仪器及与甲基化相关的测序。

产品组成：

组分	WH0206-A	WH0206-B	WH0206-AB
Single-Indexed Adapter（30μM)	12×40μl	12×40μl		24×40μl
Adapter Dilution Buffer	5×1.8ml	5×1.8ml	10×1.8ml

保存条件：-25℃~-15℃下保存，保质期一年。

Adapter Dilution Buffer成分：10mM Tris-HCl，10mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0~8.5@25℃。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
1．使用过程中，建议将BaiSeq Single-Indexed Adapter置于冰上或冰盒中，而不要置于25℃以上的环境中，以免破坏接头的结构；
2．如需对接头进行稀释，请使用试剂盒自带的Adapter Dilution Buffer，而不要使用超纯水或者其他Buffer；
3．稀释后的接头zuì好在一天内用完，不建议将稀释后的接头长期保存或反复冻融；
4．实验耗材应保证无核酸酶和核酸污染，并尽量选择低核酸吸附性的耗材进行实验。另外，在实验过程中要注意避免接头之间的交叉污染。

兼容我司文库构建产品：
1.DNA Library DirectFast Construction Kit（illumina)，目录号：WH0203；
2.DNA Library Fast Construction Kit（illumina)，目录号：WH0204；
3.DNA Library Construction Kit（illumina)，目录号：WH0200。

操作步骤：
1.如果稳定Single-Indexed Adapter在连接体系中的加入量为5 μl的前提下，那么根据初始DNA处理量和DNA片段大小的不同，接头的工作液浓度如下表所示：

DNA处理量	不同片段大小下的工作液浓度			Adaper:Insert （摩尔比）
	200bp	300bp	400bp
1μg	15μM	10μM	7.5μM	10:1
500ng	19μM	12.5μM	9.5μM	25:1
250ng	15μM	10μM	7.5μM	40:1
100ng	15μM	10μM	7.5μM	100:1
50ng	15μM	10μM	7.5μM	200:1
25ng	7.5μM	5μM	3.75μM	200:1
10ng	3μM	2μM	1.5μM	200:1
5ng	1.5μM	1μM	750nM	200:1
2.5ng	750nM	500nM	375nM	200:1
1ng	300nM	200nM	150nM	200:1
0.25ng	75nM	50nM	37.5nM	200:1

2.使用我公司相关文库构建产品时（WH0203，WH0204和WH0200），根据相关产品的DNA处理量范围，按上表进行接头母液的稀释。
3.当使用其他公司文库构建产品时，若DNA处理量大于1μg，则按接头与插入片段摩尔比10:1的标准进行接头稀释；若DNA处理量小于0.25ng，则按接头与插入片段摩尔比200:1的标准进行接头稀释；而处理DNA的摩尔数按以下公式进行计算：

4.当处理DNA片段大小在表中也没有体现的情况下，处理DNA的摩尔数也按上述公式进行计算。

接头序列信息
本产品接头序列包括如下信息：
1．Universal Sequence
  5"-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3′
2．Index Including Sequence
  5"-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC[index1-27]ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3"
3．Index编号和序列

WH0206-A		WH0206-B
Index	Sequence	Index	Sequence
1	ATCACG	13	AGTCAA
2	CGATGT	14	AGTTCC
3	TTAGGC	15	ATGTCA
4	TGACCA	16	CCGTCC
5	ACAGTG	18	GTCCGC
6	GCCAAT	19	GTGAAA
7	CAGATC	20	GTGGCC
8	ACTTGA	21	GTTTCG
9	GATCAG	22	CGTACG
10	TAGCTT	23	GAGTGG
11	GGCTAC	25	ACTGAT
12	CTTGTA	27	ATTCCT

根据您的关注的单索引接头（Illumina)，您可能还对以下产品有需求：


ZN0030 ADMR mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0056 Androgen Receptor/AR mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0060 Angiopoietin-2/AGPT2 mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0100 ATF-2 mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0186 CAS mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0203 Catenin γ mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0227 CCR2 mRNA原位杂交试剂盒 100T
ZN0233 CD14 Basignin mRNA原位杂交试剂盒 100T

关注单索引接头（Illumina)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：



名称：Actinin/Skeltal Muscle mRNA原位杂交试剂盒
货号：ZN0019
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Actinin/Skeltal Muscle mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高xīn 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：zuì重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高xīn：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到zuì佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Actinin/Skeltal的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

如果您觉得“WH0206 单索引接头（Illumina)”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从给览网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.geilan.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8563390.html
已经有1080位访客查看了本页.