ALH023 组织细胞DNA/RNA分离提取试

组织细胞DNA/RNA分离提取试是高品质的DNA提取纯化产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研试验，组织细胞DNA/RNA分离提取试是我司众多优质DNA提取纯化之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括组织细胞DNA/RNA分离提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：组织细胞DNA/RNA分离提取试剂盒
英文名称：Tissue cell DNA/RNA Extraction Kit
产品货号：ALH023
产品规格：50次

本试剂盒设计用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶，然后裂解混合物DNA/RNA同时通过一个基因组DNA吸附柱，基因组DNA被吸附而RNA穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心后洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上， 再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的RNA。无苯酚、氯fǎngDNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的RNA/基因组DNA纯度高，互不干扰。得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。

试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯fǎng等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品RNA/基因组DNA分离提取操作一般可在40分钟内完成。
3.试剂盒的独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4. 多次柱漂洗确保RNA/基因组DNA高纯度，可直接用于下游各种实验。

试剂盒组份(50次)：
裂解液RLT Plus———————————50ml
去蛋白液RW1—————————————40ml
漂洗液RW——————————————10ml
RNase-free H2O———————————10ml
70%乙醇———————————————9ml RNase-free H2O(次使用前按说明加量乙醇)
抑制物去除液IR———————————25ml
漂洗液WB——————————————15ml
洗脱缓冲液EB————————————10ml
基因组DNA吸附柱和收集管———————50套
RNA吸附柱和收集管——————————50套

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3×10^6细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过3～4×10^6，组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus、抑制物去除液IR、去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA在裂解液RLT Plus中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）
5. 关于DNA的微量残留：
一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase 消化也无法做到无残留），本公司的组织/细胞RNA/DNA分提试剂盒，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA分离清除技术，大多数DNA已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free 的DNase I 处理以提果。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。
6. RNA纯度及浓度检测：
完整性： RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S和18SrRNA。动物RNA样品中zuì大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的RNA提取物，用RNase-free水稀释n倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

储存条件：室温，有效期12个月。

本制品别名：组织DNA/RNA提取试剂盒|细胞DNA/RNA提取试剂盒

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名称：非冻型血液DNA保存液
货号：BTN60910
规格：250mL
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可常温保存血液DNA 长达六个月，尤其适合于野外血液样品采集。
2. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA 无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)。
5. 安全可靠，本产品无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一: 哺乳动物血液(包括人血液)
1. 将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。
2. 加入等体积的血液DNAhold，充分振荡混合均匀。
3. 常温闭光保存直到使用。
4. 提取DNA时，可以取出部分液体，用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜，然后再用经典的酚/氯fǎng抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽类血液
由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物，血液的使用量很少，一般只有哺乳动物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释，然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。

名称：菌体内毒素清除剂
货号：BTN90901
规格：200mL
内毒素是E.coli细胞壁的主要成分，传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来，然后再用各种方法去除其中的内毒素，操作繁琐，DNA 回收率低。本产品可以直接把E.coli 表面的内毒素去除，从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取，重组蛋白质提取)的污染。

产品特点：
1. 个在菌体收集阶段去除内毒素的产品，从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触，从根本上防止了可能产生的污染。
2. 操作简单快速，用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素，只需要10分钟左右时间，不需要复杂仪器设备。
3.，能去除99%以上的内毒素。
4.跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容，DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA 丢失率可以高达50%)。
5. 不影响DNA和大部分蛋白质的活性，处理过的质粒DNA可用于转染实验。
6. 既可小规模使用(在1.5mL离心管内)，也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一：用于菌液小于3mL的样品
1. 收集1.5-3mL E.coli 饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1mL 本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。

二：用于菌液多于3mL的样品
整个操作同上，只是在15或50mL塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力，本产品的用量按比例增加。

疑难解答：
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同，所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附，离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子)，能够形成大小不等的聚合物，跟质粒DNA和蛋白质大小接近，所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。

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