QN4087 Q-琼脂糖凝胶FF

Q-琼脂糖凝胶FF是高品质的分离试剂类产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研试验，Q-琼脂糖凝胶FF是我司众多优质分离试剂类之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括Q-琼脂糖凝胶FF在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Q-琼脂糖凝胶FF
英文名称：Q-Sepharose Fast Flow
产品货号：QN4087
产品规格：100ml

本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

Q-琼脂糖凝胶FF是将三甲胺基烷基季铵基团键合在高流速琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。本品为白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

亲和填料特性：
离子交换基团：-CH₂N⁺(CH₃)₃
离子交换类型：强阴离子，可交换离子Cl^-
基质：6%交联琼脂糖
蛋白质吸附容量：120mg HSA/ml介质
总离子交换量：0.18～0.25mmol/ml介质
形状：球形
粒径：45～165μm
流速：400～700cm/h(检测条件：层析柱10mm×300mm，柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/L NaCl)
工作温度：4～40℃
耐热：pH7水中120℃，30min
耐压：0.3MPa
pH值稳定性：1～14(短时间，在位清洗)；2～12(长时间)
pH工作范围：2～12
化学稳定性：所有常用的水相缓冲液(1mol/L氢氧化钠；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；70%乙醇；)
储存条件：4～25℃，有效期5年。

操作说明：
1．装柱
① 让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
② 根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶:缓冲液=3:1的比例）配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2～3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2．平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris、PBS等。
3．上样
① 样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。
② 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
③ 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用DEAE介质时，推荐的pH值是小于目标产品等电点1个单位。
4．洗脱
Q琼脂糖凝胶FF介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。
5．再生
  一般用高盐浓度的缓冲液（含1～2mol/L NaCl）洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
  若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6．在位清洗
① 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
② 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH去除。
③ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
  清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
7．注意
  在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
  在使用过程中，不能使用强酸，如使用酸洗，应使用浓度低于0.1M的冰醋酸。
8．去热源
  用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5～6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：
① 2倍柱体积的70%乙醇；
② 2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；
③ 1倍柱体积4M尿素；
④ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl；
  以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
9．消毒
  用0.5～1M NaOH室温下洗8～10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。
10．灭菌
  置介质于高压灭菌锅中120℃下30分钟。

注意事项：
产品应密封贮存在4～25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。避免与氧化剂接触；避免在pH<4的环境中长时间暴露(一周,20℃)。

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名称：GST标签纯化树脂
货号：QN4045
规格：5ml|10ml
pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。

别名：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B
粒度：45-165µm
流速：75cm/h          
工作pH：4～10
耐压：0.3Mpa
载量：＞5mg谷胱甘肽S-转移酶
储存条件：4℃保存，有效期至少一年。

使用说明：
谷胱甘肽树脂的处理：
1．轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2．取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
3．4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
4．在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
5．每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。制备细胞抽提物：
6．每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
7．加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
8．用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白：
9．细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
10．混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
11．沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
12．4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
13．重复步骤11和12两次。
14．结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
16．4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
17．重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定时间。
19．4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
20．10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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