BTN130504 凝胶法内毒素半定量试剂盒

凝胶法内毒素半定量试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，凝胶法内毒素半定量试剂盒是我司众多优质DNA提取纯化之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括凝胶法内毒素半定量试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：凝胶法内毒素半定量试剂盒
英文名称：Endotoxin semi-quantitative kit(Gel Method)
产品货号：BTN130504
产品规格：10×0.1mL

本试剂盒又称鲎试剂，为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品。鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度，pH值及无干扰物质)，细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。

试剂盒组成：

成分	规格
鲎试剂,灵敏度0.06 EU/mL	0.1ml×10支
说明书	1份

储存条件：常温运输，阴凉处避光保存，有效期两年。

使用方法：

一、样品溶液的制备
样品的pH值应在6.0–8.0 之间，若超出此范围，需用无热原缓冲液或0.1N氢氧化钠、0.1N 盐酸调节。若样品中可能存在鲎实验的干扰物质，见本说明书4.2“样品的干扰实验”。若样品中可能含有导致鲎试剂中G 因子旁路反应的(1,3)β－D－葡聚糖，需选用不会对(1,3)β－D－葡聚糖起反应的特异性鲎试剂。

二：细菌内毒素标准溶液及对照液的准备
2.1细菌内毒素标准溶液(本试剂盒不提供)
 取细菌内毒素工作标准品1支，按《细菌内毒素工作标准品使用说明书》配制2λ ，1λ ,0.5λ,及0.25λ的一系列内毒素标准溶液(λ为鲎试剂灵敏度标示值)。备用。
 注：鲎试剂灵敏度复核实验见本手册其他常用实验方案。
2.2 阴性对照液：即无内毒素水。
2.3 阳性对照液：即浓度为2λ的内毒素标准溶液。
2.4样品阳性对照液：即添加浓度为2λ内毒素标准的样品溶液。

三：内毒素检测
3.1 鲎试剂的溶解：按标示量(本试剂盒为0.1mL/支)加无内毒素水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在10 min内使用(即配即用)。
3.2样品溶液的制备
 样品zuì大有效稀释倍数(MVD)的计算：
 MVD＝ C?L/λ
 λ：测试用鲎试剂灵敏度标示值(EU/mL)；L：样品细菌内毒素限值；C：样品浓度或样品复溶后所得样品浓度。当L 单位为EU/mL(溶液)时，C的单位为1mL/mL；当L单位为EU/mg或者EU/U时，C的单位为mg/mL或者U/mL。按照计算所得体积，加无内毒素水制备样品溶液。
3.3 各反应管中分别加入0.1mL 阴性对照液，阳性对照液，样品，或样品阳性对照液。
 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37℃的恒温器中温育60分钟±2分钟，温育期间避免振动。
3.4 结果判断
3.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°。若管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱为阳性，记录为(+)；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱为阴性，记录为(－)。
3.4.2 只有当阴性对照管结果均为阴性，阳性对照管、样品阳性对照管结果均为阳性，实验方有效，否则无效。若阴性对照管为阳性，提示鲎试剂、无内毒素水或实验器具可能受到污染。若阳性对照管为阴性，提示鲎试剂活性减失、内毒素标准溶液效价降低，鲎试剂的灵敏度或内毒素的效价标示不准确，或内毒素标准溶液的稀释不正确。若样品阳性对照管为阴性，提示反应体系内有干扰因素存在。

四：其他常用实验方案
4.1 鲎试剂灵敏度复核实验
 当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应按《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“鲎试剂灵敏度复核实验”进行实验。按照下式复核灵敏度：λ＝lg-1(ΣX/4)，当0. 5λ≤λ ≤2.0λ时，鲎试剂灵敏度复核合格，检测时仍以标示灵敏度λ为准。
4.2样品的干扰实验
 当鲎试剂、样品的来源、配方、生产工艺或实验环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须按《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“干扰实验”进行干扰实验。以样品代替无内毒素水为溶剂，配制2λ，λ，0.5λ，及0.25λ的内毒素系列标准溶液进行灵敏度复核。若灵敏度复核值在0.5λ 到2λ之间(包含0.5 λ及2 λ)，则认为在此实验条件下样品无干扰。若灵敏度复核值在0.5λ 到2λ之外，则认为在此实验条件下样品有干扰，需对样品进行稀释(稀释倍数不得超过zuì大有效稀释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰。
4.3凝胶限度实验
 凝胶限度实验用于判断样品的内毒素含量是否超过药典所规定的细菌内毒素限值。按《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“凝胶限度实验”进行实验。在实验有效的情况下，如果样品管的两个平行管均为阴性，判定样品的内毒素含量小于药典规定限值。如果样品管的两个平行管均为阳性，判定样品的内毒素含量不符合药典规定。如果样品管的两个平行管一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，样品需做4个平行管，若所有平行管均为阴性，判定样品符合规定，否则判定样品不符合规定。
4.4凝胶半定量实验
 本方法系通过确定反应终点浓度来量化样品中内毒素含量。详见《中华人民共和国药典》2010 版中《细菌内毒素检查法》的“凝胶半定量实验”。

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名称：非冻型组织DNA保存液
货号：BTN3660
规格：250mL
本品是我公司推出的在室温条件下长期保存DNA样品的保存液。它能迅速渗入细胞内，通过抑制DNase的活性而长期保证DNA的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可室温保存动植物组织长达两年，保护DNA不被降解。
2. 安全可靠，本产品无害，从DNA保存液保存的样品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物学实验。
3. 使用简单，直接把新鲜的动植物样品浸在DNA保存液中即可。
4.可广泛用于各种动植物标本的野外采集。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

步：准备工作
1.估计完全浸没样品所需要Tissue DNA保存液的体积。
注：1g 组织约需10mL Tissue DNA保存液。
2.标记收集管并加入估计所需量的Tissue DNA保存液。

第二步：样品的处理
1.以zuì快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注：鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
2.将组织碎块完全浸没于收集管的Tissue DNA保存液中。

第三步：样品的存放
将收集管存放于温度适当的地方，保存温度不要低于4℃。

第四步：样品的使用
1.从存放处取出样品，用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
2.立即开始DNA提取。

名称：柱式冻存血液DNA提取试剂盒
货号：BTN120720
规格：50次
血液DNA是重要的研究材料，但是血液DNA在常温下存放的时间很短，因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜，释放出DNA，因此从冻存血液中提取DNA一直是个棘手的问题。本产品就是北京我公司开发的专门用于从冻存血液中提取DNA的试剂盒。

产品特点：
1.适用于各种动物血液，包括禽类和昆虫。
2. 微量提取，每次可处理400μL 血液。
3. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb 之间。
4. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在10μg/mL 血液。
5. 操作简单，整个过程约20分钟，室温操作，适合大规模样品处理。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	20ml
溶液C	100ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	50ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1.从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品，室温下静置融化。
2. 将400μL 解冻的血液转移到一个1.5mL的塑料离心管中，加入400μL溶液A，充分震荡混匀。如果是禽类血液，则少加10倍，只加40μL。
3.在混合液中加入400μL溶液B和200μL 氯fǎng(自备)，振荡1分钟。由于离心管比较满，所以需要确保管底溶液转动起来，否则只是液面振动而已。
4. 4℃12000 g离心10分钟，小心将上清转移至一新的1.5mL塑料离心管
中。注意：zuì好不要室温离心，如果室温离心，则离心后部分样品的中间白色层可能会很厚，只能得到很少的上清。
5. 将约0.7-0.8mL上清转移到10-15mL塑料离心管中(不要使用玻璃离心管，否则DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可)。
6. 加入2.5倍上清体积的溶液C(2mL)，立即摇晃混匀。
7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次0.7mL左右，转移后静置2-5分钟，以使DNA与膜充分结合，然后室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液，然后再加入0.7mL，重复上述操作，直到全部混合液挂柱。
8.在离心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液，室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液。
9.在离心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液，室温12000 g离心30秒，弃收集管中的废液。
10.室温12000 g离心30秒，去尽残留液体(此步骤十分重要，不要省略，否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应)。
11. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管中，加入50μL DNA 洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0在65℃预热后再使用，洗脱DNA的效果更佳。
12.室温12000 g离心30秒，离心管底部溶液即DNA溶液，可立即使用或-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强，如果再次用DNA 洗脱液2.0洗脱，还能洗脱下一些血液DNA。

疑难解答：
Q：保存血液样品时温度越低越好吗？
A：不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃，-20℃，4℃保存了6个月的蛙血，发现保存温度越低，血液DNA的断裂越严重。
Q：本产品是否可以用于放量操作？
A：可以在大的离心管中进行放量操作，如每次处理5-100mL 血液，只是客户需要单独购买红细胞裂解液，并按比例增加溶液A和溶液B的用量。
Q：冷冻血液为何DNA产量很低？
A：冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜，红细胞裂解液处理时释放的DNA将进入上清并丢失，所以zuì后得到的DNA是没有被冰晶刺破的细胞的DNA。

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