BTN60807 柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒

柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科学研究，我公司的柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒
英文名称：Endotoxin-free plasmid DNA column extraction kit
产品货号：BTN60807
产品规格：50次

本试剂盒是整合我们公司柱式质粒DNA提取和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我们公司推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	13ml
溶液B	13ml
RNase A(10mg/mL)	150μl
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低温运输和保存。

使用方法：

一: 用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
1. 收集1.5-3mL E.coli饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1mL本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。
二：从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
1. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
2. 加入250μl溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。
3. 加入250μl溶液B(如果有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可。千万不要剧烈振荡。
4. 加入350μl溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上静止2-5分钟。注意：不要超过5分钟。
5.室温12000rpm离心10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6. 12000rpm离心1分钟，质粒DNA吸附到膜上，弃收集管中的废液。
7. 加入500μl的通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。注意：我们公司的通用洗柱液是由乙醇和含NaCl的溶液组成，NaCl在其中的溶解度较低，放置一段时间后可能会产生NaCl沉淀。如果有沉淀，用前zuì好加热使之溶解并混匀后使用。
8. 重复上步操作1次。
9. 12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA沉不到加样孔里去)和酶反应。
10. 将离心柱置于新的1.5mL离心管(自备)中，加入50μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。
11. 12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
12. 由于天我们公司的吸附柱结合DNA能力较强，需要再加入50μl DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，室温放置2分钟，重复上步操作，往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于次洗脱的20-30%)。注意不要使用上步得到的含有DNA的洗脱液来进行第二次洗脱。
13. 将两次洗脱收集到的质粒DNA汇集即可立即使用或放冰箱保存。

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名称：柱式毛发DNA提取试剂盒
货号：BTN80805
规格：50次
动物毛发不容易降解，同时含有大量的线粒体，所以是考古研究、法医研究和线粒体研究等领域的重要性实验材料。目前市场上专门用于毛发样品DNA提取的产品很少，为此我们研发了本产品。

产品特点：
1.充分的酶法降解和快速的柱式提取相结合，前者使DNA充分释放，后者使杂质充分被去除。
2.DNA回收率一般在0.5μg/100mg左右(理论产率一般是0.1-1.5μg之间)。
3.DNA纯度高，OD比值一般在1.6-1.8之间。
4.提取的DNA能够用于电泳、酶切、杂交检测和PCR。
5.适合于动物的各种毛发。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50mL
蛋白酶K溶液(10mg/ml)	1mL
溶液B	15mL
溶液C	50mL
离心吸附柱(15层膜)	50套
通用洗柱液	50mL
DNA洗脱液	5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1.将30-50mg左右毛发充分剪碎(成芝麻大小就可以)，zuì后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：zuì好从靠近根部的地方剪取样品。
2.加入1mL溶液A(使用之前需取本次实验所需的溶液A现加入自备的β-巯基乙醇，β-巯基乙醇的终浓度为5%)和20μL蛋白酶K溶液(20mg/mL)，37℃保温10小时(一般过夜保温就可以)。
 注意：zuì好让反应体系处于摇晃状态，此保温长度一般可以让毛发溶化。
3.加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自备氯fǎng，振荡器上振荡30秒充分混匀。
4.12000rpm室温离心3分钟，小心将上清转移到新的1.5mL塑料离心管中。
5.在上清液中加入等体积的溶液C，上下颠倒30秒充分混匀。
6.将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将0.7-0.8mL混合液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm室温1分钟，弃穿透液。再把剩余的一半上柱，重复此操作。
7.将0.7mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8.将0.3mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12000rpm离心半分钟(此步为第二次洗涤，一般可以省略)。
9.空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。
10.将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30μL通用洗脱液。
11.12000rpm离心1分钟，管底即为毛发DNA溶液，可立即用于PCR，也可长期保存在－20℃。
 注意：由于头发中DNA的含量十分少，所以电泳检测时即使全部上样也只能看见十分微弱的DNA条带。

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