WH0058 石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒

石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒等RNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒
英文名称：Total RNA Extraction Kit from Paraffin Embedded Tissues
产品货号：WH0058
产品规格：50次

本试剂盒可从福尔马林固定石蜡包埋组织切片（以下简称FFPE)中提取总RNA。由于固定和包埋的条件限制，FFPE样本核酸通常发生片段化并且会被甲醛化学修饰，因此较难提取，本试剂盒提取的RNA可应用于RT-PCR等下游试验。

产品应用：
·采用硅基质膜柱法纯化方式，在可能的程度内获得的总RNA纯度更高、信息更为完整。
·相对于传统方法，操作更为简便、快捷。
·适用于下游的RT-PCR或RT-qPCR等实验检测。

提取实例：

上图为本试剂盒提取大鼠肝脏石蜡包埋切片样本总RNA，用50μl RNase-free ddH2O洗脱后，取8μl上样，1%琼脂糖凝胶，6V/cm电泳20min。起始量：约15mg组织。

试剂盒组成：

组分	50T
裂解液RF	12ml
缓冲液RB	12ml
去蛋白液RW1	40ml
漂洗液RW	12ml
Proteinase K	500μl
RNase-Free ddH2O（瓶装）	40ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管）	50套
DNase I	1500U
缓冲液RDD	4ml
RNase-Free ddH2O（管装）	1ml
RNase-Free离心管（1.5ml）	50个

储存条件：室温（15-25℃)保存。DNase I，缓冲液RDD和RNase-Free ddH2O（管装)置于2-8℃保存。

自备试剂：二甲苯、无水乙醇

使用前注意事项：
1．次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
2．DNase I储存液的配制：将DNase I干粉（1500U）溶解在550μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。

起始材料：
1．标准的福尔马林固定石蜡包埋程序也常常会造成核酸的片段化。为了尽量降低RNA片段化的可能性,应该按照以下操作步骤进行样本处理：
·组织切除后应尽快浸入4%-10%的福尔马林溶液中；
·固定时间zuì好为14-24h（固定时间过长会导致RNA片段化更严重,不利于下游的试验；
·样本包被之前必须彻底脱水。
2．应采用新鲜的FFPE组织切片,切片厚度不超过10μm，切片过厚可能会造成RNA得率低，每次制备采用的切片数应不超过8片，表面积应不超过250mm2。
3．如果没有起始样本的信息，建议初次制备采用的切片数应不超过2片，然后根据RNA的得率和纯度，下次制备采用的切片数可以进行调整，但应不超过8片。

操作步骤：
1．将石蜡样品切成5-10μm厚的片状。
注意：如果样品表面暴露于空气中,zuì初的2~3片弃掉不用。
2．迅速将2-8张切片置于1.5ml RNase-Free的离心管中，加入1 ml二甲苯，剧烈涡旋10 sec。
3．室温（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)离心2min。
4．用枪头吸除上清，小心不要吸到沉淀。
5．加入1 ml无水乙醇于沉淀中，涡旋混匀。
6．室温（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)离心2min。
7．用枪头吸除上清，小心不要吸到沉淀（用一个新的枪头小心吸出残余的乙醇）。
8．打开管盖，室温（15-25℃)或37℃放置10 min直至残余的乙醇挥发完全。
  注意：完全去除残余的乙醇很重要，残余的乙醇会对RNA产生影响。
9．加入200 μl裂解液RF以及10 μl Proteinase K于沉淀中，彻底涡旋混匀。
10．55℃孵育15 min之后80℃孵育15 min。
11．室温（15-25℃)，12000rpm（~13400×g)离心5 min，转移上清入新的RNase-Free离心管中。
12．加入220 μl的缓冲液RB，涡旋混匀。
13．加入660 μl的无水乙醇，涡旋混匀（可能会出现沉淀)。
14．转移700 μl溶液和沉淀入吸附柱CR3中（吸附柱放在收集管中），12000rpm（~13400×g)离心1 min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
15．重复步骤14，直到所有的溶液和沉淀完全通过吸附柱CR3，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
16．DNase I工作液的配制：取10 μl DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀。
17．向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I工作液，室温放置15 min。
18．向吸附柱CR3中加入500 μl去蛋白液RW1，室温（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
19．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2min，12000rpm（~13400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
20．重复步骤19。
21．室温（15-25℃)，12000rpm（~13400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：此步骤目的是将吸附柱CR3中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
22．将吸附柱CR3转入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2min，12000rpm（~13400×g)离心2min，得到RNA溶液。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。配置胶用RNA专用系统。

根据您的关注的石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒，石蜡包埋组织切片总RNA提取试剂盒，石蜡组织切片总RNA提取试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：昆虫RNA柱式提取试剂盒
货号：BTN81220
规格：50次
本试剂盒是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品(尤其是昆虫样品)中提取总RNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3.适用于各种昆虫组织，每100mg组织能提取到20-30μg 总RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.一站式，提供RNase-free的样品收集管。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(RNA洗脱液zuì好4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 将50-300mg昆虫组织放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备lǜ仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000 rmp离心3～5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
11.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 12000 rmp室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。注意：大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段，彼此用氢键相连，所以在甲醛变性胶中，没有28S带出现(文献见：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7)
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

关注石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒，石蜡包埋组织切片总RNA提取试剂盒，石蜡组织切片总RNA提取试剂盒的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
BTN81102	石蜡包埋组织RNA提取试剂盒	30次
BTN130847	柱式白色念球菌RNA提取试剂盒	50次
BTN3073	一管式病毒RNA提取试剂盒	100次
BTN90904	膜结合DNA清除试剂盒	50次
WE0196	固定组织RNA提取试剂盒	50次
ALH022	微量样品RNA提取试剂盒	50次
QN0922	固相RNase清除剂	100mL|250mL

如果您觉得“WH0058 石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从给览网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.geilan.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8561402.html
已经有1050位访客查看了本页.