WH0031 高纯质粒大量提取试剂盒

高纯质粒大量提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科学研究，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多高纯质粒大量提取试剂盒等DNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括高纯质粒大量提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高纯质粒大量提取试剂盒
英文名称：High Purity Plasmid Mass Extraction Kit
产品货号：WH0031
产品规格：10次

本试剂盒采用独特的缓冲系统，同时加入我公司特制的颜色指示剂，保证更有效地得到大量高纯度质粒。使用本试剂盒可根据不同的实验需求，灵活地选择处理菌液的初始体积，并采用传统的异丙醇沉淀方法，快速地获得大量高纯度的质粒DNA，满足多种不同的后续实验需求。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。

产品特点：
·得率高：异丙醇直接沉淀，zuì高可获得1.5mg质粒DNA。
·纯度好：经缓冲液P4和过滤器CS处理，满足多数转染实验要求。
·简便快捷：只需简单的几步离心，1小时左右完成实验。
·应用广泛：适用于酶切、PCR、转化、测序和转染等分子生物学实验，颜色指示剂使您的质粒提取效率更有保证。

提取实例：

用本试剂盒提取100ml菌液的pEGFP质粒（OD600=1.95)和pCMV质粒（OD600=2.05)

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率
高拷贝质粒	菌液100ml	500μg～1.5mg质粒
低拷贝质粒	菌液200ml	200μg～400μg质粒

试剂盒组成：

组分	10T
溶液P1	100ml
溶液P2	100ml
溶液P4	100ml
颜色指示剂	500μl
洗脱缓冲液TB	30ml
RNase A（100mg/ml)	500μl
过滤器CS1	10个

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使用前先检查溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．自备约60ml的5M NaCl溶液。
4．注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。
5．使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动。
6．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热。
7．颜色指示剂的使用方法：颜色指示剂用以指示整个操作的正确性，对人体无害。颜色指示剂为可选试剂，客户根据需求选择是否添加。如果提取质粒后需要进行转染实验，不建议客户在实验中加入颜色指示剂。使用时按照颜色指示剂:溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色；添加P2之后彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色，则说明充分裂解；再添加溶液P4至彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，说明中和复性充分。

颜色指示剂：

图1：菌体中加入含颜色指示剂的P1溶液，彻底混匀后溶液为浑浊的红色
图2：添加P2彻底混匀后，溶液颜色为澄清的紫色。如果在紫色中混有浑浊的红色，则裂解不充分，会大大影响质粒的提取效率，需继续混匀至颜色变为澄清的紫色。
图3～4：添加P4彻底混匀后，溶液颜色为澄清的黄色。如果在黄色中混有紫色（图3所示)，则复性不充分，会导致得到的双螺旋质粒量减少，需继续混匀至颜色变为澄清的黄色（图4所示)。

使用方法：

1．取100 ml （根据培养菌体的浓度选择合适的量，低拷贝推荐用200 ml)过夜培养的菌液，室温10000rpm （~11500×g )离心3 min收集细菌。
  注意：菌液较多时，可多次离心并将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2．尽量吸除上清，为确保上清液全部吸取，请倒置干净的吸水纸上。
3．向留有菌体沉淀的离心管中加入10 ml溶液P1（请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：请务必彻底混悬，如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。颜色指示剂的加入对于后续PCR、酶切和测序都没有影响。使用时按照颜色指示剂:溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色。如果提取质粒后需要进行转染实验，不建议客户在实验中加入颜色指示剂。
4．向离心管中加入10ml溶液P2，立即温和地上下翻转6-8次，使菌体充分裂解，室温放置5min。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
  如果使用了颜色指示剂，添加P2之后彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色。如果在紫色中混杂有浑浊的红色，则说明裂解不充分，继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色。
5．向离心管中加入10 ml溶液P4，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，至溶液出现白色分散絮状沉淀。然后室温放置10min左右。10000rpm （~11500×g )离心5-10min，使白色沉淀离至管底（可适当增加离心时间），将全部溶液小心倒入过滤器CS1中（请避免倒入大量沉淀而阻塞过滤器），慢慢推动推柄过滤，滤液收集在干净的50 ml的管中（客户自备）。
  注意：加入溶液P4后应立即混匀，避免产生局部沉淀。如果离心后倒入过滤器CS1中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤。如果菌体过多（>100 ml），推荐延长离心时间至20-30 min。
  如果使用了颜色指示剂，添加溶液P4之彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，如果在黄色中混有紫色，则说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色。
6．向滤液中加入0.35倍滤液体积的异丙醇和1/2倍异丙醇体积的5M NaCl，上下颠倒充分混匀。
  注意：若此处无沉淀出现为正常现象。
7．4℃ 10000rpm （~11500×g )离心30 min，轻轻倒掉上清液，将其倒置在吸水纸上。
8．向管中加入6 ml 70%乙醇充分漂洗沉淀，4℃ 10000rpm （~11500×g )离心10min，轻轻倒掉上清液，将其倒置在吸水纸上。
9．重复操作步骤8。
10．将离心管敞口室温放置10-20 min，使乙醇充分挥发后加入1-1.5 ml洗脱缓冲液TB，充分溶解沉淀。
  注意：洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.5-8.0范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液用量的多少主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要的浓度来确定。洗脱缓冲液体积不少于1 ml，体积过小影响回收效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

质粒DNA浓度及纯度检测：
1．得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为多条带，这些条带是质粒的多聚体造成的，不影响后续的酶切、转染等实验。OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。
2．纯化的质粒DNA OD₂₆₀/OD₂₈₀通常在1.8-2.0左右，可直接应用于分子生物学等常规操作。如果溶解时不使用缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。

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货号	名称	规格
BTN70302	一步离心式石蜡清除剂	100次
BTN101111	柱式软体动物DNA提取试剂盒	50次
BTN70903	一步法质粒DNA提取试剂盒2.0	50次
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名称：非冻型血液DNA保存液
货号：BTN60910
规格：250mL
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可常温保存血液DNA 长达六个月，尤其适合于野外血液样品采集。
2. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA 无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)。
5. 安全可靠，本产品无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一: 哺乳动物血液(包括人血液)
1. 将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。
2. 加入等体积的血液DNAhold，充分振荡混合均匀。
3. 常温闭光保存直到使用。
4. 提取DNA时，可以取出部分液体，用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜，然后再用经典的酚/lǜ仿抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽类血液
由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物，血液的使用量很少，一般只有哺乳动物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释，然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。

名称：柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒
货号：BTN120406
规格：15次
本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和柱式植物DNA抽提试剂盒而推出的新兴产品,专门用于植物叶绿体DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 纯度高,不含污染和抑制剂,可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、 mμLtiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验,不会发生离心柱堵塞现象。
2.产率一般在1-2μg/1g叶片样品。OD260/280一般在1.8以上。DNA片段长度一般在40-50Kb左右。
3. 本产品足够15次提取,每次可处理30g叶片。
4. 已经成功用于菠菜,大豆,莴笋,白菜,烟草和甜菜等双子叶植物,也适用于单子叶等其他植物(可能需要优化条件)。

试剂盒组成：

成分	规格
叶绿体纯化匀浆液成分一	250mL×2
叶绿体纯化匀浆液成分二	3g
Percoll	60mL
带柄尼龙滤膜	1个
叶绿体DNA纯化溶液A	15mL
叶绿体DNA纯化溶液B	7.5mL
叶绿体DNA纯化溶液C	30mL
离心吸附柱	15套
通用洗柱液	15mL
DNA洗脱液2.0	10mL
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但匀浆液成分二长期保存时需要放4℃)，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感,所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行,所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行,离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能,提取还需要在昏暗的光线条件下进行。强烈建议用显微镜监控整个过程中叶绿体的回收情况。

一：叶绿体的纯化
1.实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成,否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净,再用蒸馏水淋洗,去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理,则保存时需要保持叶片湿润,即使如此,叶片的放置时间也不能超过一天。
2.计算实验所需叶绿体匀浆液的体积(下面简称匀浆液),本试剂盒一次实验可处理30 g叶片,对一般植物,每克叶片需要准备4mL匀浆液,则一次实验需要准备120mL匀浆液。对烟草和大豆,每克叶片需要6mL匀浆液,则一次实验需要准备180mL匀浆液。为了保险可以多配10%。
3.实验当天制备匀浆液。制备方法是：将自备的去离子水与试剂盒提供的匀浆液成分一在干净的玻璃或塑料容器中按4：1的比例混合,然后在每100mL混合液中加入匀浆液成分二干粉0.1g(终浓度为0.1%),轻柔搅拌10分钟后,所得溶液即为匀浆液。冰上预冷待用。匀浆液只能当天使用,不能放置。
4.预留1.5mL用于悬浮叶绿体,其余匀浆液转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中,再快速将新鲜植物叶片的叶脉去除,再将叶片剪成1-3cm2大小的碎片,浸泡在匀浆机里面的匀浆液中。
5.低速匀浆10秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的叶碎片按入到匀浆机底部,再低速匀浆10秒。
 注意：还可用Dounce玻璃匀浆器,Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等匀浆,但它们单次处理量小,需分成很多份处理后再汇集,非常不方便。
6.用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,用预冷的200mL量筒收集穿透液,再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的穿透液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜洗涤干净后可反复使用。
7.在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对菠菜,白菜和莴笋材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料),白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。其他植物材料则需要用户自己摸索zuì佳离心力。
8.将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
9.在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀含叶绿体。
10.在沉淀中加入1.5mL预冷的匀浆液,手弹离心管底部使叶绿体重悬。
 注意：重悬时zuì好避免溶液起泡,也不要用枪头吹打,否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象,但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
11.将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL),得到叶绿体粗提液。
12.如果对叶绿体DNA是否含细胞核DNA的要求不高,则叶绿体粗提液可以直接用于叶绿体DNA纯化,具体操作是在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀为叶绿体,直接用于DNA纯化(见步骤二)。
13.如果需要无细胞核DNA污染的叶绿体DNA,则按以下流程操作：在50mL塑料离心管中先加入6mL匀浆液成分一和4mL的Percoll,充分混合均匀得到40%的Percoll溶液,在其液面上小心铺上6mL的叶绿体粗提液,在水平转子离心机上4℃ 1700g离心6分钟,管底绿色沉淀为完整的叶绿体,液面的绿色部分为破碎的叶绿体。小心将上清去除后,直接将沉淀(完整叶绿体)用于叶绿体DNA纯化(见步骤二)。

二：叶绿体DNA的纯化(溶液A和溶液B容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,均需65℃溶解并摇匀后待用)
14.将600μL预热的溶液A加入到叶绿体沉淀中后充分吹打混匀。
15.加入300μL预热的溶液B,震荡混匀10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠,可以采取称量方法称取300mg(约等于300μL)使用或将1mL枪头剪去一截后再吸取300μL使用。
16.65℃放置3～5分钟。如果室温放置,DNA产量会降低10-20%。
17.加入200μL自备lǜ仿,震荡混匀10-30秒。
18. 12000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液(约0.8mL)到一个新的3-5mL离心管中,避免触及中间层的白膜,可留少量上清不取。
19.加入1.5倍体积(约1.2mL)的溶液C,颠倒混匀后先转移0.7mL到离心吸附柱中,室温放置至少2分钟。12000rpm室温离心1分钟,DNA将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。
20.再将剩余的溶液按上步方法上柱。
21.将0.5mL通用洗柱液加入到吸附柱中,12000rpm室温离心1分钟,弃穿透液。重复操作一次。空甩半分钟去除残留液体。
22.将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加50-100μL DNA洗脱液2.0,室温放置3～5分钟。
23.12000rpm室温离心1分钟即得植物叶绿体DNA溶液,直接取5-10μL电泳检测,其余放冰箱备用。

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