RFT035 动物组织细胞DNA提取试剂盒

动物组织细胞DNA提取试剂盒的品牌是百奥莱博，是优质的DNA提取纯化产品，本制品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要动物组织细胞DNA提取试剂盒等DNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括动物组织细胞DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：动物组织细胞DNA提取试剂盒
英文名称：Animal tissue cell DNA Extraction Kit
产品货号：RFT035
产品规格：50次|100次

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，能提取多种细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以、专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

提取效率：
动物细胞培养液(样本量10^6～10^7)：5～30 μg
动物组织(样本量30mg)：10～30μg

试剂盒组分;

组份	50次	100次	贮存方式
缓冲液GA	15 ml	30 ml	室温
缓冲液GB	15 ml	30 ml	室温
去蛋白液GD(浓缩液)	18 ml	36 ml	室温
漂洗液PW(浓缩液)	25 ml	25ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	15 ml	室温
蛋白酶K(20 mg/ml)	1ml	2×1ml	-20℃
RNase A(10 mg/ml)	0.5 ml	1 ml	-20℃
吸附柱CG	50个	100个	室温
收集管(2 ml)	50个	100个	室温
说明书	1份	1份

准备工作：
1. 准备55℃和70℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2. 按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液GA，缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、处理材料：
a. 培养细胞：贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(如用PBS缓冲液或类似缓冲液)，10,000 g离心1分钟，倒尽上清，加入200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
b. 组织：取约30mg动物组织(脾组织用量应少于10 mg)加入到事先盛有200μl 缓冲液GA的1.5ml离心管中，用研磨杵彻底将组织研碎。
2、加入20μl蛋白酶K (20 mg/ml)溶液。
a. 提取细胞基因组时，加入蛋白酶K混匀后，55℃放置5-10分钟。
b. 提取组织基因组时，加入蛋白酶K混匀后，在55℃放置，直至组织溶解。
注：不同组织裂解时间不同，通常需1-3小时即可完成(鼠尾需要消化过夜),期间间歇颠倒混匀样品。
3、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混匀后室温放置2分钟。
4、加入220μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置一段时间后会消失。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，会影响DNA的纯度和得率，而且可能导致步骤6中离心柱堵塞。
5、加入220μl 无水乙醇，颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入乙醇后会产生絮状沉淀，可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理，容易导致步骤6中离心柱的堵塞。
6、将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g离心2分钟，倒掉废液，吸附柱CG放回收集管中。
注：如果出现吸附柱堵塞现象，可将离心时间延长到5分钟。
7、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
8、向吸附柱CG中加入700μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
9、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液。
10、将吸附柱CG放回废液收集管中，11000g离心2分钟。
注：此步骤非常重要，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，11000g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积zuì好不少于100μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
12、DNA产物-20℃保存。

储存条件：室温，有效期12个月。

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名称：非冻型尿液DNA保存液
货号：BTN90315
规格：100mL
本品在室温条件下长期保存用于DNA提取的尿液样品保存液。它能够、长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可室温保存尿液DNA长达六个月，尤其适合于野外尿液样品采集。
2. DNA完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4. 能防止尿液在4℃结晶。
5. 安全可靠，本产品无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的尿液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 迅速将尿液与本产品按10:1的比例混合。
2. 常温闭光保存直到使用。
3. 使用常规液体DNA提取方法提取DNA即可。推荐使用柱式尿液DNA提取试剂盒(BTN90314)，使用柱式尿液DNA提取试剂盒提取本产品保存的尿样，兼容性好，提取效率更高。
4. 提取得到DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。

名称：菌体内毒素清除剂
货号：BTN90901
规格：200mL
内毒素是E.coli细胞壁的主要成分，传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来，然后再用各种方法去除其中的内毒素，操作繁琐，DNA 回收率低。本产品可以直接把E.coli 表面的内毒素去除，从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取，重组蛋白质提取)的污染。

产品特点：
1. 个在菌体收集阶段去除内毒素的产品，从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触，从根本上防止了可能产生的污染。
2. 操作简单快速，用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素，只需要10分钟左右时间，不需要复杂仪器设备。
3.，能去除99%以上的内毒素。
4.跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容，DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA 丢失率可以高达50%)。
5. 不影响DNA和大部分蛋白质的活性，处理过的质粒DNA可用于转染实验。
6. 既可小规模使用(在1.5mL离心管内)，也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一：用于菌液小于3mL的样品
1. 收集1.5-3mL E.coli 饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1mL 本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。

二：用于菌液多于3mL的样品
整个操作同上，只是在15或50mL塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力，本产品的用量按比例增加。

疑难解答：
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同，所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附，离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子)，能够形成大小不等的聚合物，跟质粒DNA和蛋白质大小接近，所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。

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