SY0554 细胞膜可渗透钙离子荧光探针

细胞膜可渗透钙离子荧光探针由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要细胞膜可渗透钙离子荧光探针等探针标记及检测产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括细胞膜可渗透钙离子荧光探针在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞膜可渗透钙离子荧光探针
英文名称：Fluo-4, AM, Cell Permeant
产品货号：SY0554
产品规格：50μg|5×50μg|1mg

细胞生物学实验中常使用Fluo-3, AM作为一种荧光探针来检测细胞内钙离子浓度变化。其检测原理基于Fluo-3,AM可穿透细胞膜进入细胞，之后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60至80倍。

Fluo-4, AM是钙指示剂Fluo-3,AM的升级版本，主要变化为后者分子上的两个氯原子被Fluo-4,AM上的氟所取代，该结构上的微小变化使Fluo-4,AM加载更快，在相同浓度下检测信号更强。

本产品为Fluo-4,AM粉末状，用于细胞内钙离子检测时，Fluo-4, AM的常用浓度为0.5-5μM。

CAS：273221-67-3
分子式：C51H50F2N2O23
分子量：1096.95
Ex/Em(nm)：Ex/Em=494nm/516nm
纯度：≥98%
外观：粉末
储存条件：-20℃避光干燥，有效期至少6个月。
结构式


注意事项
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）本Fluo-4,AM 容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂其微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。
3）次使用时，建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。
4）母液遇水易分解，如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成5μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
5）建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到zuì佳实验条件。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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规格：10mL

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规格：5次
本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3′突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和dì高辛标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带dì高辛标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
TdT缓冲液，5×	20μl
TdT(末端转移酶，10U/μL)	10μl
dATP，2mM	5μl
标记核苷酸	(A、B、C不同，见注)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μl体系的标记反应(如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度)：

成份	用量
探针DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4μl
标记核苷酸，1mM (A型需自备标记核苷酸)	1μl
dATP，2mM	(见下注)
TdT末端转移酶(10U/μL)	2μl
超纯水	补到20μl

注：dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定zuì佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长)；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已)，每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/lǜ仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。

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