QN4071 辛基-琼脂糖凝胶CL-4B

产品简介
北京百奥莱博供应的辛基-琼脂糖凝胶CL-4B用于科研试验,辛基-琼脂糖凝胶CL-4B是我司众多优质分离试剂类之一,质量堪比同类进口产品,价格非常优惠,目前正热烈促销中,恭候您的咨询订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括辛基-琼脂糖凝胶CL-4B在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:辛基-琼脂糖凝胶CL-4B
英文名称:Octyl-Sepharose CL-4B
产品货号:QN4071
产品规格:25ml
辛基-琼脂糖凝胶CL-4B是琼脂糖凝胶CL-4B的辛基衍生物,含有疏水性正辛基。具有较好的流速,在配基和骨架间的键很稳定,可反复在pH7.0、120℃热压消毒。纯化疏水性较弱的蛋白质或膜蛋白,因其经去污剂处理后仍有强疏水性。
技术参数:
基质:4%琼脂糖凝胶
配基:正丁烷基n-Octyl
配基密度:40μmol/mL
颗粒大小:45~165μm
zuì大流速:50cm/h
每毫升结合量:15~20mgHSA
操作温度:室温
保存条件:4~28℃
使用方法:
1.装柱
①nbsp;将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
②nbsp;根据柱子大小取所需凝胶的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1比例)配成匀浆。
③nbsp;将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
④nbsp;用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意不要使用气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
⑤nbsp;打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2.平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液,如:0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3.上样
①nbsp;样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心、过滤后上柱;
②nbsp;一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡洗液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产品。
③nbsp;介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。温度越大、盐浓度越高或样品组分疏水性越强,介质对组分吸附越牢。
4.洗脱
疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱。zuì常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液,如:0.02~0.05mol/L的PBS。
5.再生
一般用低盐浓度的缓冲液洗,洗10倍以上柱体积,接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活的蛋白或者脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6.在位清洗
①nbsp;对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
②nbsp;对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质,可用1M NaOH去除。
③nbsp;对强疏水性结合的蛋白、脂类等,可用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
清洗完毕后,用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。
7.去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或者用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下步骤去除:
①nbsp;2倍柱体积的70%的乙醇;
②nbsp;2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5
③nbsp;1倍柱体积4M尿素
④nbsp;3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl;
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
8.消毒
用0.5~1.0M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
辛基-琼脂糖凝胶CL-4B注意事项
①nbsp;密封贮存于4~28℃(保存溶液为20%乙醇+0.1M醋酸钠),通风、干燥的地方,不能冷冻。用过的柱子贮存于4℃(20%乙醇)。
②nbsp;在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。
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葡聚糖凝胶G-100利用分子筛作用,进行多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定。
葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶液中溶胀。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程,可在较低的压力下获得较高的流速。另外,粗级也可用于批量工艺。
葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的,在强酸中凝胶骨架的糖昔键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶,因而应避免使用。
葡聚糖疑胶并不熔融,可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。
性 状:白色微球,多孔
凝胶类型:凝胶过滤填料,亲水型凝胶
结构成分:交联右旋糖酐
粒 径:40~120µm
工作PH值:2~10
操作温度:4~40℃
球蛋白分离范围:4000~150000
保存条件:4~25℃
使用方法:
1.葡聚糖凝胶预处理:
在室温下,将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,或者用蒸馏水煮沸至少1小时直至充分溶胀,凝胶体积不再变化。
注:在溶胀前,加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降,沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多,需要重复多次漂洗将其除去,防止层析时阻塞凝胶柱,影响流速。
2.装柱:
将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层; 装柱要均匀,可在凝胶耐受的操作压下装柱,装好的凝胶柱可以检测柱效,检测过滤柱装填是否合格。
凝胶层析分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度:分级分离时,一般需要100cm左右长的层析柱,柱高与直径之比为20:1-100:1,柱高过高时,凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压,应当尽可能避免;分组分离(例如脱盐)时用短柱,柱高控制在40-50cm以下,柱高与直径的比约为5:1-10:1。
3.平衡:
上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
4.上样:
分级分离时上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积。
样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去,样品的粘度不能过高,否则影响分离效果。
5.洗脱方法:
可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
6.在位清洗(CIP)
凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。 方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向清洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
7.保存
凝胶柱暂时不用,可将其回收,一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干,可加入0.02%叠氮化钠防腐或用20%乙醇浸泡,以控制微生物生长。
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