QN1063 pEGFP-N3 哺乳动物细胞表

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特别提示：包括pEGFP-N3 哺乳动物细胞表达载体在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pEGFP-N3 哺乳动物细胞表达载体
产品货号：QN1063
产品规格：20μl

本产品包含一份质粒和一份含该质粒的克隆菌种，收到产品后请取1ul质粒转化进合适的宿主。不建议优先使用甘油菌。如需使用菌种，请于抗性琼脂平板上四区划线，挑单菌落培养。

载体类型：荧光表达载体
载体大小：4729bp
载体抗性：Kanamycin(卡那霉素)
载体标签：C-EGFP
筛选标记：Neomycin (新霉素)
复制子：ori
启动子：CMV
克隆菌株：哺乳细胞
培养条件：LB，37℃有氧
pegfp-N3 哺乳动物细胞表达载体

储存条件 ：-20℃

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货号	名称	规格
BTN160101	pression/BTN160101.html" target="_blank">pUCm-T载体	1μg
YT412	pression/YT412.html" target="_blank">EDTA溶液(0.5M)(pH8.0)	100ml
YT447	pression/YT447.html" target="_blank">ARE荧光素酶报告基因质粒(抗氧化响应元件)	1μg
YT454	pression/YT454.html" target="_blank">Rb荧光素酶报告基因质粒(Rb抑癌基因质粒)	1μg
YT467	pression/YT467.html" target="_blank">C端mCherry标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白)	1μg
SY0280	pression/SY0280.html" target="_blank">多片段一步法(快速/无缝)克隆试剂盒	10T
MQ0017	pression/MQ0017.html" target="_blank">DH10B化学感受态细胞	10×100μl/50×100μl

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名称：大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN90505
规格：0.1mL*10
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。
该感受态细胞用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3 区的lacUV5启动子，该区域整合于BL21的染色体上。
菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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