MQ0022 Turbo化学感受态细胞

Turbo化学感受态细胞是高品质的克隆与表达产品，由北京百奥莱博供应，本产品仅用于生物化学研究方面，Turbo化学感受态细胞是我司众多优质克隆与表达之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括Turbo化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Turbo化学感受态细胞
英文名称：Turbo Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0022
产品规格：10×100μl/50×100μl

Turbo菌株是生长zuì快的大肠杆菌菌株。平板上6.5小时可见克隆，营养液中摇菌4-6小时可提取质粒，缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；Turbo菌株可严格控制laclq的表达，可以克隆毒性基因；fhuA2突变赋予Turbo菌株对噬菌体T1的抗性；lacZΔM15的存在使Turbo可用于蓝、白斑筛选。Turbo感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F"proA+B+ lacIqΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lac-proAB)glnV galK16 galE15 R(zgb-210::Tn10)TetS endA1 thi-1 Δ(hsdS-mcrB)5
操作说明：
1.Turbo感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(SOC或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养6.5小时以上。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2.混入目的DNA时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或率的连接产物可相应减少zuì终用于涂板的菌量。

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名称：cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
货号：BTN90407C
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN90505
规格：0.1mL*10
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。
该感受态细胞用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3 区的lacUV5启动子，该区域整合于BL21的染色体上。
菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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