MT0002 全血microRNA提取试剂盒

全血microRNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要全血microRNA提取试剂盒等RNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括全血microRNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：全血microRNA提取试剂盒
英文名称：microRNA Extraction Kit From Blood
产品货号：MT0002
产品规格：25T|100T

我公司的全血microRNA(miRNA)提取试剂盒提取小RNA(＜200nt)具有操作步骤简单、重复性zuì好、产率较高的特点。核酸提取的成功与否、提取质量的好坏对后续实验起着至关重要的作用。使用TRIzol试剂提取总RNA，对总RNA中包含的部分小RNA进行研究，该方法的缺点是总RNA中microRNA的比例较小，同时由于mRNA的干扰，会导致后续反转录和RealTime PCR实验效率很低，很难获得理想的实验结果，且结果不可靠。Biorab在探索miRNA分子功能的过程中开发的全血miRNA提取试剂盒，通过一步上柱即可获得纯度高达98%的不含大RNA的miRNA，而且可在45分钟内完成小RNA的提取。该miRNA提取试剂盒广泛适用于冻存和新鲜的抗凝全血样本（不适用于血清和血浆），每150μl全血可获得~1μg的microRNA。

产品组成：

组分	MT0002A	MT0002B
miRNA Reagent A	7.5ml	30ml
miRNA Reagent B	10ml	40ml
miRNA 吸附柱	25套	100套
Rnase-Free TE Buffer	5ml	5ml

储存：室温可保存2年。
自备试剂：异丙醇、乙醇、75%异丙醇
注意：miRNA Reagent A溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。

操作方法：
1．向1.5ml EP管中加入300μl miRNA Reagent A。将150μl 抗凝全血加入到上述300μl miRNA Reagent A中，立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置 5分钟 以充分裂解细胞。
2．向上述裂解完毕的裂解液中加入250μl miRNA Reagent B，上下颠倒混合均匀。13000rpm离心5分钟，吸取550μl上清液，转移到新的1.5ml EP管中。
3．向上述溶液中加入200μl无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置 5分钟。
4．13000rpm离心10分钟，转移700μl上清液到新的1.5mlEP管中。
5．向上述溶液中加入300μl 异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。
6．分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
7．向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
8．向吸附柱中加入500μl无水乙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
9．吸附柱 13000rpm 空离心2分钟，去掉残留的乙醇。
10．将吸附柱放入到新 1.5ml EP管中，室温放置 2分钟，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μl RnaseFree TE Buffer，室温静置 2分钟，13000rpm离心2分钟，洗脱产物即为提取的miRNA。（通常取3～5μl该产物，即可使用我司TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应，货号：MT0006）。


图例：应用全血miRNA提取试剂盒（MT0002）提取全血的microRNA。
 泳道1-3：-80℃冻存一年的全血；
 泳道4-6：新鲜抗凝全血。


常见问题：
1．本方法提取的小 RNA，95％以上为小 RNA（<200nt），有时会残留一些>200nt的RNA，通常残留的>200nt RNA不影响后续试验操作。
2．本试剂盒提取的小 RNA 由于不含 mRNA 等大分子量的RNA，因此更适合做后续反转录试验，从而进行定量试验。
3．使用本试剂盒提取的microRNA 浓度通常在50ng/μl 左右，取5～10μl即可用于电泳检测。取3~5μl即可用于我司TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应（货号：MT0006），通常使用我司优化的miRNA-TaqMan RealTime PCR技术（货号：MTTxxxxx）。

根据您的关注的全血microRNA提取试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：软体动物RNA柱式提取试剂盒
货号：BTN101113
规格：50次
本试剂盒专门从各种软体动物组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软体组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

试剂盒特点：
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物，包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
3. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
4. 操作简单，整个提取过程一般只需要10 多分钟。
5. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA 纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将50-200mg 新鲜或冷冻的软体组织液氮研磨成粉，加入1mL溶液A溶解(溶液A使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀)，然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中，振荡混合30秒。也可以将软体组织剪碎后与溶液A一起用Polytron 匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20秒，再转移到1.5mL离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯fǎng，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3.室温12000～15000g离心3～5分钟，两相间将有约5-10 毫米厚的细胞破碎物。
4. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。zuì好留下100μL上清液不取。
5. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中，加入50-100μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
12. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意：测定OD时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA 测OD时一般zuì多只能稀释10-20倍。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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