YT015 红色核酸染料

红色核酸染料的品牌是百奥莱博，是优质的核酸电泳和回收产品，本制品用于科研试验，红色核酸染料是我司众多优质核酸电泳和回收之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括红色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：红色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)
英文名称：Nucleic Acid Red(2000X)
产品货号：YT015
产品规格：1ml|5ml

本品是一种优于溴化乙锭（EB）的核酸染料，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色，可替代升级SYBR Green。本核酸红染料具有安全(致突变性低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品染色后用适当紫外灯(300nm左右波长)检测呈现红色荧光，适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统。

本核酸红染料比EB和SYBR Green更安全。本核酸红染料在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明，本核酸红染料的诱变性远小于EB。EB在多种致突变测试中呈现很强的诱变性，而本核酸红染料仅仅在浓度高达20微克/毫升时，并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性。通常本核酸红染料在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升，大大低于可导致诱变的浓度。本核酸红染料和百奥莱博的另外一种安全型核酸染料核酸绿色染料（YT016），由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA，并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。

本核酸红染料检测灵敏度高，对于小分子量核酸的染色效果好。本核酸红染料的检测灵敏度比EB高8-10倍，在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时，本核酸红染料和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高；与SYBR Gold不同的是，本核酸红染料预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸的染色效果差，而本核酸红染料对于小分子量核酸的染色效果很好，便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。推荐使用的本核酸红染料浓度，其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度，可以适当提高本核酸红染料的工作浓度。

本核酸红染料的稳定性好，染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差，这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而本核酸红染料的稳定性很好，可以室温长时间保存及使用微波炉加热。本核酸红染料的光稳定性良好，可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性，含本核酸红染料的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。

本核酸红染料可以使用和EB相同的检测体系。本核酸红染料和EB的激发光和发射光都非常接近，可以直接用本核酸红染料替换EB，而不必更换已有的凝胶观察、拍照或成像系统(约300nm激发)。本核酸红染料的激发光谱和发射光谱请参考下图。


本品核酸红染料的激发光谱和发射光谱

本品可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便，而后者灵敏度要更高一些。但由于本品本身已经非常灵敏，通常采用把本品直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。

本品对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。通过凝胶回收试剂盒（YT010）或酚氯fǎng抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的红色染料，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。

储存条件：室温，避光，有效期一年。

注意事项:
1.本产品兼容常用的电泳缓冲液，例如TAE和TBE。
2.本品和EB一样，作为荧光染料均需避光保存，但在使用过程中的常规室内光照不会影响其使用效果。
3.制备好的本品琼脂糖凝胶，在4℃避光条件下通常可以保存3-5天。
4.本品琼脂糖凝胶再次熔化使用时，为取得更好的观察效果，需要添加适量本品。
5.电泳之后的凝胶不建议重复使用。
6.电泳后再使用本品染色的凝胶一般不需要脱色。如果发现背景太高，可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。
7.本品和核酸绿色染料（YT016）除了可以染色双链DNA外，也可染色单链DNA和RNA。本品对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。本品对单链核酸的染色灵敏度约为YT016的5倍。
8.如果使用聚丙烯酰胺凝胶，请使用浸泡染色法染胶，并延长染色时间至30分钟-1小时。
9.如果观察到条带弥散或者分离不理想，建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题，说明与染料无关，请尝试以下方法：使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。


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货号	名称	规格
BTN70503R	DNA marker(100-2000bp)	50次
BTN70503T	DNA marker(250-15000bp)	50次
BTN70503Z	DNA marker(300-10000bp)	50次
BTN131187	Acryl DNA助沉剂	1mL
BTN60402	超快非醇核酸沉淀剂	30次
BTN110801	核酸浓缩剂	30mL

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名称：一站式RNA电泳套装
货号：BTN60904
规格：10次
本品是包括琼脂糖、去离子甲醛、RNA上样液、电泳液等在内的RNA电泳套装，专门用于RNA电泳分析。可以进行至少10次mini变性胶电泳。

产品特点：
1. 即开即用，用户不需要自己进行RNase 灭活、高压灭菌、pH调节等操作。
2.与Northern杂交等后续反应兼容。

产品组成：

成分	规格
琼脂糖	5g
超纯水	250ml
甲醛	60ml
RNAload(含EB)	0.5ml
RNAep，10×	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但收到货后RNAload 需要4℃保存，RNAep，10×一旦打开需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有器皿(三角瓶，电泳槽，枪头等)均需去除RNase。强烈推荐使用本公司的的固相RNase 清除剂。

一、配制琼脂糖甲醛变性胶(1.2%，100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份：琼脂糖 1.2-1.5g；DEPC水 87mL
2. 将琼脂糖加热融化后，加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS缓冲液，其瓶子一旦打开，就很容易产生污染细菌，细菌大量繁殖后会释放大量 RNase，所以剩下的10×RNAep zuì好-20℃放置)。
3. 待胶冷却至 60℃左右，再加下列成份：甲醛 3.0mL；自备EB(10mg/mL)2-4μL
注意：由于本试剂盒提供的RNAload中含EB，所以也可以不加EB，但效果较差。如果使用自备的其他染料，如SYBR Green I，则不能同时使用其他染料，包括含EB的RNAload，用户需要另购不含EB的RNAload)。
4. 混匀后倒胶，凝固半小时后即可以使用。

二、配制电泳液
5. 将RNAep 用DEPC 水稀释十倍后即成电泳液，所需要的体积根据使用的电泳槽决定。

三、变性RNA样品
6.在一干净的离心管中将5-10μL RNA和15μL RNAload 混合，50-60℃保温10分钟后冰浴5-10分钟，直接上样。注意：每一泳道至多可分析30μg RNA，通常用10-20μg 总RNA进行Northern杂交，可以检测高丰度mRNA(占mRNA 总量的0.1%以上)；如待测RNA含量微，每个泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。

四、电泳
7.电泳时，将凝胶预电泳5 min(电压为5 V/cm)。随后加样品和分子量对照(如果有的话)，以3－4 V/cm的电压电泳，直至染料迁移至胶下游的3/4处。
8.电泳结束后，在300nm 紫外灯下拍照。

五、后续处理
9. 按标准方法进行Northern杂交等后续处理。

使用效果：

图注: 用本产品电泳兔全血总RNA效果图。10μL 总RNA与15μL RNAload 混合后在甲醛琼脂糖变性胶上电泳0.5小时，直接在紫外灯下观察并照相。

疑难解答：
Q：RNA电泳为何zuì好使用RNAep，不要使用DNA电泳液TAE或TBE？
A：一是因为RNAep 经过去RNase处理，而一般实验室使用的TAE或TBE都没有经过去RNase处理，故有可能含RNase，使样品RNA 降解。即使要灭活TAE或TBE中的RNase 也十分麻烦，因为DEPC 不能处理含Tirs的缓冲液；二是TEB含有硼酸，硼酸是研究多羟基醇和糖的经典试剂，它能与RNA中含多羟基的核糖反应生成糖硼酸络合物，故电泳时RNA 带型十分弥散。在一定浓度范围内，RNA分子间还能通过硼酸形成分子间复合物，出现电泳时各种RNA以一条带的形式出现的现象。所以RNA电泳时要避免使用含硼酸的缓冲液。使用TAE效果虽然比TBE 稍好，但文献报道(BioTechniques 2000，28:414-415)，它不能分离某些大小不同的RNA分子。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议zuì好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。
使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼酸能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNAScavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何我的植物RNA样品有4-5 条带？
A：部分植物组织有叶绿体等质体，而叶绿体有核糖体，所以也有其rRNA。
叶绿体的rRNA跟细胞浆里面核糖体的rRNA大小不同，所以一般会多出两条带(共4 条rRNA 条带)。小的tRNA和5S rRNA 有时可见，有时不可见，取决于回收效率。

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