ALH099 PCR产物DNA纯化回收试剂盒

北京百奥莱博供应的PCR产物DNA纯化回收试剂盒用于科学研究，我公司的PCR产物DNA纯化回收试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括PCR产物DNA纯化回收试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PCR产物DNA纯化回收试剂盒
英文名称：PCR product purification recovery Kit
产品货号：ALH099
产品规格：50次|100次|200次

本试剂盒适用于PCR反应产物、酶切产物DNA片段、探针标记纯化回收，DNA样品浓缩等。在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，zuì后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份(100次)：
平衡液——————————10ml
结合液BB—————————60ml
漂洗液WB—————————25ml
洗脱缓冲液EB———————15ml
吸附柱和收集管(2ml)-———100套

试剂盒特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质结合液，不含传统结合液的碘化nà和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.结合液调制成为了黄颜色，便于监测pH值变化从而达到zuì佳结合效果，大大提高回收效率。
4.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、lǜ仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。
4. 回收DNA的量和起始DNA的量，洗脱体积，DNA片断大小有关。一般1-15μg，100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达95％。
5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在－20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

储存条件：室温，有效期12个月。

本制品别名：PCR产物回收试剂盒|DNA样品浓缩试剂盒|标记探针纯化回收试剂盒

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名称：土壤腐殖酸清除剂
货号：BTN70603
规格：250mL
土壤和湖海沉积物中都含有棕黑色或黑色的腐殖酸，它们对PCR等后续反应有大的抑制作用，所以有效去除土壤中腐殖酸是提取土壤微生物DNA的重要环节。但是目前市场上没有专门的产品，针对这一情况，百奥莱博开发了本产品，专门用于对提取DNA用的土壤进行预处理，以清除腐殖酸成分。

产品特点：
1. 清除效果好，一次能使腐殖酸的浓度降低50%左右。
2.适合于黄色、红色、黑色和棕黑色等各种质地的土壤和河海沉积物。
3. 操作过程简单快速，一次处理只需要10分钟。
4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用及效果：
按每1克土壤加10mL本产的比例将样品混合，振荡3～5分钟，3000-5000g室温离心5分钟，弃上清，沉淀可直接用于DNA提取。此操作可以多次重复。

图注：比较水和本产品处理泥碳(腐殖酸含量大于60%)样品的效果，C为用水处理后离心得到的结果，1-5是同一土壤样品用本产品洗涤1-5后所得到的上清液。

图注：用我司土壤DNA提取试剂(BTN60701)提取泥碳样品所得到的DNA溶液，1号样品所用土壤预先用水洗涤过三次，2号样品预先用本产品洗涤过三次。

名称：丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒
货号：BTN130831
规格：15次
线粒体是重要的、负责能量产生的其重要的细胞器。对丝状真菌线粒体进行生化，遗传和分子生物学研究都需要行线粒体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的，专门用于从丝状真菌叶片中纯化完整线粒体、再从中纯化线粒体DNA的试剂盒。

试剂盒特点：
1. 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2. 所得线粒体可用于后续的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析、线粒体DNA和线粒体RNA纯化。
3. 本产品足够15次线粒体纯化和15次线粒体DNA提取，每次可处理10-20g菌丝体，能得到1-5mg左右线粒体。
4. 已经成功用于Aspergillus candidus、Aspergillus nidμLans、Magnaporthe oryzae、Neurospora crassa、Penicillium chrysogenum、Rhizopus stononifer等丝状真菌。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	250mL×2
成分B	150g
溶液C	120ml
带柄尼龙滤膜	1个
通用线粒体DNA溶液A	10ml
通用线粒体DNA溶液B	5ml
通用线粒体DNA溶液C	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：纯化DNA提取用的线粒体的要求比纯化功能研究用的线粒体的要求要低，但整个操作还是zuì好在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液zuì好在4℃预冷，离心zuì好要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。

一：菌丝的摇瓶培养
1. 使用合适的丝状真菌培养基，接种孢子至终浓度为2×10E6/mL。一般100mL液体培养基可以得到0.8-1.2g菌丝体，而本方法一次可以处理10-20g菌丝体，故zuì好一次培养1-2升。
2.在合适的温度(如25℃、30℃或37℃，根据真菌不同而不同)250rpm/min摇晃培养16-20小时。
3. 用多层纱布或多层过滤纸过滤收集菌丝，用冰浴的自备去离子水洗涤菌丝三次去除残留的培养基。
4. 用吸水纸吸干菌丝的水分，称重后立即使用。如果在-80℃或液氮长期放置，线粒体回收效率将减低。

二：线粒体粗提液的制备
5. 制备溶液A工作液：每次提取需150mL溶液A工作液，制备方法是将20mL溶液A和130mL自备去离子水混合，冰上预冷即可。
6.在200mL烧杯中，加入100mL预冷的溶液A工作液，再加入新制备的菌丝体，然后全部转移到Waring匀浆机(家用果汁匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把菌丝按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等方法，但它们单次处理量一般都较小，需多份处理再汇集。
7. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，用预冷的200mL量筒收集穿透液。
8. 将剩下的菌丝体转移到Waring匀浆机中，再加入40mL预冷的溶液A工作液，低速匀浆10秒，用上步的带柄尼龙滤膜过滤，用预冷的200mL量筒收集穿透液。注意：带柄尼龙滤膜后可反复使用。
9. 将穿透液分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个约35mL)。
10.在水平转子离心机上4℃ 4000g离心10分钟，小心转移上清(含线粒体的部分)到4个新的离心管中。沉淀含细胞核和未裂解的细胞，可以弃之不用。如果要用于纯化细胞核DNA，则可以放-80℃长期保留。
11. 将含上清液的4个离心管在4℃ 10000g离心20分钟。
12. 每个离心管中加2.5mL预冷的溶液A工作液重悬线粒体沉淀并汇集(共约10mL)，此为线粒体粗提液。
13. 如果直接用线粒体粗提液提取线粒体DNA，容易有细胞核DNA污染。
 具体步骤是：在水平转子离心机上4℃ 10000g离心7分钟，小心弃上清，沉淀为线粒体，直接用于第三步的线粒体DNA提取。
14. 如果需要高纯度、无污染的线粒体DNA，则需要用密度梯度离心法将完整的线粒体和其他细胞碎片进一步分离。具体见下步线粒体精提液的制备。

三：线粒体精提液的制备(密度梯度离心法)
15. 制备重液和轻液：将4.1克成分B干粉加到6.3mL溶液C中，充分摇晃混匀得10mL重液。将4.1克成分B干粉加到6.3mL去离子水中，充分摇晃混匀得10mL轻液。
16.在50mL塑料离心管中先加入10mL重液，再在其上轻轻加上10mL轻液，zuì后加上第11步所得的约10mL线粒体粗提液。
17. 加平衡离心管后在水平转子冷冻超速离心机上4℃ 43000g离心2小时，重液和轻液间的带为完整线粒体。
18. 用广口吸管小心将线粒体转移到新的离心管中，加入等倍体积的预冷的溶液C，轻柔混匀。取少量在相差显微镜下检查线粒体完整性。
19.在水平转子离心机上4℃ 19000 g离心20分钟，小心将上清吸出后，线粒体沉淀可以直接用于DNA提取。

四：线粒体DNA提取
20. 将600μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液A加入到上步得到的线粒体沉淀中并吹打混匀，然后转移到1.5mL离心管中。
21. 65℃放置5分钟。
22. 加入300μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液B，震荡混匀10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠，可以将其预热到65℃并剪掉一截枪头后再取。
23. 加入200μL自备的lǜ仿，震荡混匀10-30秒。
24. 12000g室温离心3分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。
25.小心转移上清液(约0.8mL)到一个新的1.5mL离心管中，避免触及中间层的白膜，可留少量上清不取。
26. 加入1倍体积的通用线粒体DNA提取试剂盒溶液C，颠倒30次混匀。
27. 12000g室温离心5分钟，小心弃上清液。
28.在离心管中加入1mL自备的75%乙醇，震荡30秒。
29. 12000g室温离心1分钟，小心弃上清液。
30. 12000g室温离心半分钟，残留液体将汇集在管底。
31. 用洗液枪吸弃管底残留液(约50μL)。
32. 加50-100μL自备的TE缓冲液，溶解DNA沉淀即得线粒体DNA溶液。直接取5-10μL电泳检测，其余放直接使用或放-80℃冰箱备用。

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