YT377 富含GC PCR Buffer

富含GC PCR Buffer是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，我公司的富含GC PCR Buffer品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括富含GC PCR Buffer在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：富含GC PCR Buffer
英文名称：GC-rich PCR Buffer
产品货号：YT377
产品规格：2ml

本品提供了4种不同的GC-rich PCR Buffer，为扩增高GC含量的DNA片段提供了多种不同的选择，大大提高了高GC含量DNA片段的扩增成功率。

本套装提供的Buffer可以单独使用，也可以组合使用。这样可以在更多条件下优化PCR条件。

提供了推荐的几种经过优化的GC-rich PCR Buffer的组合方式，便于用户直接选用。

根据相关文献报道，单一的GC-rich PCR Buffer对于某一个高GC含量的DNA片段的扩增效果很好，但对于另外一个高GC含量的DNA片段则很可能会扩增效果不太理想。正因为很难采用一种通用的GC-rich PCR Buffer 完成对于不同的高GC含量DNA片段的扩增，因此对于高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点。针对这一实际情况，我司推出了可以给予用户多种条件进行优化组合的4管套装GC-rich PCR Buffer。

本GC-rich PCR Buffer可以适用于各种常见的耐热DNA 聚合酶例如Taq DNA polymerase、Pfu DNA polymerase等。

产品组份：
5×GC-rich PCR Buffer A————0.5ml
5×GC-rich PCR Buffer B————0.5ml
5×GC-rich PCR Buffer C————0.5ml
5×GC-rich PCR Buffer D————0.5ml

注意事项：
1）在使用本试剂盒提供的GC-rich PCR Buffer的同时，必须同时使用和DNA聚合酶配套的zuì终浓度为1×的含镁离子PCR Buffer。
2）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

储存条件：-20℃。

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名称：25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)
货号：BTN130307
规格：5mL
本产品为专门用于易错PCR的MnCl2水溶液，浓度为25mM，可用于调节MnCl2的zuì佳浓度。由于Mg2+在PCR过程中可以稳定非互补的碱基对，Mn2+能够降低聚合酶对模板的特异性，因而调整两种离子的浓度，可获得不同突变频率的多样性文库。

氯化锰分子量为125.8，CAS号为7773-01-5，水合氯化锰外观为玫瑰色单斜晶体；无水氯化锰外观为桃红色结晶。密度为2.977g/cm3。熔点是650℃。在高于熔点温度下升华。沸点1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
货号：BTN91202
规格：50次
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒，它含有除模版RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等，可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR反应(RT-PCR反应)。

产品特点：
1.一管式完成RT-PCR反应，避免样品交叉污染。
2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到zuì低，大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA 到人RNA的各种RNA 模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR 体系zuì低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的zuì长达2000nt。
6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。

试剂盒组成：

成分	规格
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有离心管用前zuì好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分：

成分	阴性对照	样品
RNA模板(自备，分下面三种情况)	无	见下
总RNA	无	100-500ng
或poly(A)mRNA	无	10-500ng
或体外转录得到的专一RNA	无	0.01 pg-500ng
RNA特异性引物一(自备)	终浓度300nM	终浓度300nM
RNA特异性引物二(自备)	终浓度300nM	终浓度300nM
探针(仅对Realtime RT-PCR)	终浓度200nM	终浓度200nM
RNase-free水	补到13μL	补到13μL
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	15μl	15μl
MMLV-Taq Mix	2μl	2μl

注：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM，探针浓度200nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM 范围内调整引物浓度，在50～400nM 范围内调整探针浓度以达到zuì佳检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减DEPC 水用量，保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃，30 钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注)、zuì后72℃，5分钟。对Realtime PCR，在复性步骤设置荧光检测，检测通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR结束后取5-10μL电泳检查。

注意事项：
1. 使用已校准的移液器，选用一次性PCR反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置尽可能靠近上游引物，PCR 目标片段zuì好小于200bp，尽可能在150bp以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择zuì适当的引物浓度、样品浓度和PCR扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR反应管，避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时，zuì好间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM荧光PCR 仪，应将毛细管放在专门套管中，以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架，以免折断；若发生折断，应小心取出，用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区，避免PCR产物污染。

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