HR0329 BCA蛋白定量试剂盒

BCA蛋白定量试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多BCA蛋白定量试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括BCA蛋白定量试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BCA蛋白定量试剂盒
产品货号：HR0329
产品规格：250T|500T|1000T

碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
BCA法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 法测定蛋白浓度不受大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂(DTT，巯基乙醇)和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

储存条件：BCA试剂室温保存。蛋白标准-20℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ● 水
● 涡旋振荡器 ●分光光度计或酶标仪

使用方法：

使用注意事项：
1.在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解,如发现细菌污染则应丢弃。
2．因为BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非
控制显色反应的时间和温度，否则如需测定，每次测定都需重做标准曲线。若需得到更为的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
3．若测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，原因可能是样品中含
有严重干扰BCA 法测定蛋白浓度的物质。BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性，参见附件BCA蛋白浓度测定兼容性表。
4．试剂A 与试剂B用应密闭保存。
5．当试剂A和B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失。
6．使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。
孔酶标板测定：
1．BCA 工作液配制。根据样品数量，按50 体积BCA试剂A 加1 体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA 工作液，充分混匀。
2．蛋白标准工作液配制：根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5倍稀释，配成1mg/ml的工作液。
3.标准曲线绘制。
4．振荡混匀后，37℃放置30分钟。
5．用酶标仪测定A562，以不含BSA的光吸收值为空白对照。
6．以蛋白含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
7．样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取20μl 样品，加入200μl BCA工作液，混匀后37℃放置30分钟，然后以0 号孔为对照，测定样品吸收值A562。
8．根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
9．计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积20μl，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
比色皿测定：
按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。

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名称：弱RIPA裂解液
货号：BTN131008
规格：250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表：

产品名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
细胞核转录因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制剂	是	是	是
含磷酸酯酶抑制剂	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

备注：
1.为取得zuì佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

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