RFT045 超低分子量蛋白Marker I

超低分子量蛋白Marker I是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研试验，超低分子量蛋白Marker I是我司众多优质蛋白质研究之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)
英文名称：μltra Low Molecμlar Weight Protein Marker I
产品货号：RFT045
产品规格：10T(100μl)

本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-22kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。




储存条件：-20℃。

根据您的关注的超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)，您可能还对以下产品有需求：



名称：12mL亲和层析柱
货号：BTN140651
规格：12mL
本产品适用范围广泛，可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子；还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。

亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原－抗体、酶－底物或抑制剂、激素－受体等)，通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法，其示意图如下：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

常用亲和标签及纯化方案：


名称：一站式GST标记蛋白质微量纯化套装
货号：BTN111116A
规格：20次
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品zuì好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐酸胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

关注超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
BTN130526	细菌专用蛋白酶抑制剂	1mL
WE0279	Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒	50次
WE0303	显影粉	20套
RFT197	蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母蛋白提取用)	1ml|5×1ml
KFS034	多聚赖氨酸溶液0.1%(Poly L-Lysine)	10ml(免疫组化用)
KFS053	Cy3标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒	300T
SY0401	MBP标签蛋白高度交联纯化树脂	5ml|25ml

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