WH0074 2×Pfu PCR预混反应液

2×Pfu PCR预混反应液由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，我公司专注于核酸扩增(PCR)产品的研发、生产和供应，为您提供的2×Pfu PCR预混反应液质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括2×Pfu PCR预混反应液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×Pfu PCR预混反应液
英文名称：2×Pfu PCR MasterMix
产品货号：WH0074
产品规格：1ml（不含染料)|5×1ml（不含染料)|1ml（含蓝色染料)|5×1ml（含蓝色染料)

本制品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可zuì大限度的减少人为误差。适用于高保真PCR反应、复杂模板如GC含量高（>60%），有二级结构等的扩增和大规模基因检测。

产品特点：
·显著提高PCR反应的特异性和灵敏度，还能有效扩增GC含量高、二级结构等复杂模板。zuì低可扩增2个拷贝的目的模板，使实验结果更加。
·独特的Pfu MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，多次冻融或长期放于4℃亦不会影响活性。
·稳定预配好的PCR混合液快速简便，大大降低劳动强度和取样误差，而且加入了高性能的PCR增强剂和优化剂，降低了对PCR条件的要求。
·分成含染料和不含染料两种体系。含染料的MasterMix产品在PCR结束后可以直接电泳，无需加入上样缓冲液。

保存条件：-20℃可长期保存，多次冻融不会影响活性。如需经常使用，可存放于4℃

产品稳定性：一管便捷式PCR MasterMix系列所有产品在-20℃条件下可保存一年以上，多次冻融或长期放于4℃不影响活性。4℃放置三个月，无明显活性改变。

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名称：即用型易错PCR试剂盒
货号：BTN101005
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。

产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：

易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自备DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自备，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
补水到	30μl

2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR	94℃ 1分钟	循环30次(见注)
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。

循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。

PCR循环数	每个碱基突变几率	PCR终产物中的突变位点数
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。

疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但zuì好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCRzuì好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。

关注2×Pfu PCR预混反应液，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
BTN100814	Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)	5μg
BTN130833	LAMP可见光染料	1mL
BTN130923	LAMP扩增阳性对照	50次
YT389	dNTP套装(100mM)	4×50μl
YT400	核酸酶清除剂(核酸酶喷雾清除剂)	250ml
WE0160	超纯dNTP混合液(10 mM)	1ml|5ml

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