JN0046 PCR产物纯化回收试剂盒

我公司致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白，包括PCR产物纯化回收试剂盒在内的各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特别提示：包括PCR产物纯化回收试剂盒(测序级)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PCR产物纯化回收试剂盒(测序级)
产品货号：JN0046
产品规格：100次

  本试剂盒利用核酸外切酶I和热敏碱性磷酸酶，仅需简单的保温步骤，方便地去除多余的引物和dNTPs，净化的PCR产物可直接用于测序反应，且不会

损失任何产物。此法可以避免繁琐的胶回收、柱纯化、沉淀、磁珠、过滤、透析等方法，大大节省实验费用及时间。适用于大规模PCR产物净化测序，大幅提高实

验效率。

为什么设计本试剂盒：
对PCR产物的测序通常需要对PCR产物进行胶回收、柱纯化等处理，不仅成本高，操作复杂，而且还必然损失一定量的产物。在PCR产物不易获得的情况下，采用以

上方法往往会使实验的费用和时间成倍增加。如果能对PCR产物直接测序将解除这些烦恼。

试剂盒组份：

组成	体积
核酸外切酶I（20U/μl）	50μl
热敏磷酸酶（5U/μl）	100μl
10×AP Buffer	1ml

本试剂盒设计原理：
PCR反应结束后，由于产物里一般还残留着引物及dNTPs，这些残留物会阻碍测序反应的进行，如果去除它们，就可以实现对PCR产物的直接测序。热敏碱性磷酸酶

可以分解残余的dNTPs，而核酸外切酶I可高特异性地分解单链DNA，而对双链DNA无作用。用这两种酶对PCR产物进行“净化”后，可彻底降解残留引物及dNTPs，

随后的80℃保温过程 完全灭活核酸外切酶I和热敏碱性磷酸酶，使净化后的产物可直接用于测序反应。

操作步骤：
1、取出7.5μl PCR反应混合物；
2、在反应混合物中加入0.5 μl (10 units)的核酸外切酶 I (20000 units/ml), 37℃反应15分钟；
3、再加入1μl的10×AP Buffer 和1μl (5 units) 热敏磷酸酶，37℃反应15分钟；如果反应时间延长，可减少酶用量，需试验验证。热失活核酸外切酶 I和热

敏磷酸酶：80℃保温20分钟，终止反应。反应物可直接用于测序。

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货号	名称	规格
BTN100839	PCR级甲酰胺	250mg
BTN131227	10nt随机引物(0.5μg/uL)	250
BTN100203	通用型LAMP试剂盒	50次
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名称：一管式反转录试剂盒
货号：BTN170403
规格：10次
本产品是一管式反转录预混Mix，内含反转录链合成所需的所有试剂(MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer等)，用户只需加入模板 RNA和RNase-Free 水即可进行反应。

产品特点：
1. cDNA的合成更加方便，用户只需准备模板和水即可进行反应。
2.快捷，操作步骤已经zuì大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3. 效率高，特殊优化的oligo dT和N6 随机引物配比，反转录效率高。
4. 速度快，只需42℃，20分钟即可完成cDNA 链的合成。
5. 能够用于GC含量高，二级结构复杂的RNA 模板，合成cDNA片段长度可达12kb。
6. 兼容性好，合成的cDNA可直接用于荧光定量PCR反应，灵敏度高、稳定性好。

试剂盒组成：

成分	规格
2×RT MasterMix	0.1ml
RNase-Free 水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 解冻后颠倒轻弹混匀各组分，以20μL 体系为例，按下表加入(2×RT Master Mix很粘稠，取用前请短暂离心，并避免吸头外壁沾附损失)：
2×RT MasterMix

10μl
Total RNA/mRNA 模板(自备)	50ng-2μg/5-200ng
补RNase-Free 水到	20μl

 注意：对于二级结构很复杂的RNA 模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟后迅速转移到冰上，再进行下一步操作。
2. 轻轻混匀，42℃孵育20分钟进行反转录反应。
 注意：对亍二级结构复杂或者GC含量高的模板，可以提高温度至50℃，以增强反转录效率。
3. 85℃加热5秒钟灭活反转录酶置冰上备用(更长时间保存请置于-20℃)。

注意事项：
1. 实验过程中请注意避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。
2. 使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度丌均影响实验结果。
3. 使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。
5. 如果扩增片段较长或者RNA结构复杂，为了加强转录效果，可以将RNA单独置于65-70℃加热5-10分钟后再加入体系。
6. 操作人员请带口罩和一次性手套，并经常更换手套。

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