BTN130957 免RNA提取RT-PCR试剂盒

免RNA提取RT-PCR试剂盒是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研试验，免RNA提取RT-PCR试剂盒是我司众多优质核酸扩增(PCR)之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)
英文名称：Cell Lysate RT-PCR Mix
产品货号：BTN130957
产品规格：100次

本产品是一种免RNA提取的RT-PCR的试剂盒，它使用精心优化的细胞裂解液直接裂解培养细胞和痕量组织块，然后直接在细胞裂解液中进行RT，再用cDNA进行PCR或荧光定量PCR。

产品特点：
1. 免RNA提取，从细胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR结果只需3个步骤约3小时，省略了整个RNA提取过程。
2. 灵敏度不低于常规方法(先提总RNA再进行RT-PCR)，不但可以检测到低拷贝的RNA，还可用于检测miRNA。
3. 整合了去除基因组DNA的步骤，只检测RNA，无需担心基因组DNA的污染。
4. 每次只需要10-10000个培养细胞或含相应细胞数的痕量组织(如LCM样品)，验证过的细胞包括Hela、CHO、293、COS-7等，但不能用于U937细胞系。
5. 两步法RT-PCR，后续使用灵活。得到的cDNA既可用于普通PCR，也可用于基于SYBR的荧光定量PCR，也可用于其他定量PCR(如TaqMan)，非常灵活。
6. 有单管操作和多孔板操作两种模式，前者适用于少量样品，后者适用于平行处理大量样品，适用于高通量筛查。
7. 本产品足够100次50μL体系的RT反应和600次30μL体系的PCR反应。

试剂盒组成：

成份	规格
细胞裂解液成分一	3.8mL
细胞裂解液成分二	300μL
细胞裂解液成分三	100μL
Oligo(dT),0.5ug/uL	50μL
随机引物,0.2ug/uL	50μL
MMLV逆转录酶(含RI)	300μL
PCR MagicMix3.0	9mL
RNase-free 水	10mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

根据您的关注的免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)，您可能还对以下产品有需求：



名称：PCR级高GC的DNA清除剂
货号：BTN61203
规格：1.5mL
本产品是我司开发的专门用于富含GC的DNA模板扩增的试剂。

产品特点：
1.，使用效果普遍好于常规的添加DMSO和甜菜碱的方法。
2.可以处理GC含量高达80%的DNA模板。
3. 操作简单，将本产品用于溶解DNA沉淀即可使用。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
将乙醇沉淀的高GC DNA直接溶解在适量的本产品中，充分吹打均匀，然后直接将DNA加入PCR反应体系中进行PCR反应。加入的DNA溶液zuì好不要超过PCR终体积的1/10。剩余的DNA可以长期保存。

名称：即用型易错PCR试剂盒
货号：BTN101005
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。

产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：

易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自备DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自备，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
补水到	30μl

2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR	94℃ 1分钟	循环30次(见注)
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。

循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。

PCR循环数	每个碱基突变几率	PCR终产物中的突变位点数
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。

疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但zuì好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCRzuì好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。

关注免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
BTN131227	10nt随机引物(0.5μg/uL)	250
BTN130609	一步式RT-PCR Mix	1mL
BTN70906	NTP溶液(10mM)	0.5mL
WE0112	2×BaldStar Taq MasterMix(含染料)	5ml
WE0148	一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒	100次
WE0154	BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)	1ml|5ml

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