WH0063 快捷型总RNA提取试剂盒

快捷型总RNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，我公司的快捷型总RNA提取试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括快捷型总RNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：快捷型总RNA提取试剂盒
英文名称：Total RNA Extraction Kit
产品货号：WH0063
产品规格：50次

本试剂盒是一种以异硫氰酸胍/酚为基础的RNA提取方法。独特配方的裂解液RZ能快速有效去除细胞中基因组DNA和蛋白质，使获得的RNA纯度高，稳定性好。

本试剂盒用于从血液、动物细胞、组织、植物组织中分离总RNA，每个离心柱每次可处理50-100mg组织或5×10⁶细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA得率更高，纯度更好，没有DNA和蛋白的污染，可用于多种下游实验。

产品特点：
· RNA纯度更高，无杂质残留，特别适合于对纯度要求高的下游实验。
·应用广泛，可提取多种不同实验样本。
·操作简单，可在一小时内完成实验。

下游应用：
· RT-PCR。
· Northern Blot、Dot Blot。
· Real-Time PCR。
· polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。

试剂盒组成：

组分	50T
裂解液RZ	60ml
去蛋白液RD	12ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O	15ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管)	50套
RNase-Free离心管（1.5ml)	50个

储存条件：室温（15-25℃)保存，裂解液RZ应在2-8℃避光保存。

预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V)，放置过夜，高压灭菌。）

使用前注意事项：
若提取细菌RNA，推荐应用培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒（目录号：WH0060）

操作步骤：
次使用前应在去蛋白液RD、漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

1．样品处理
a．组织：将组织在液氮中磨碎。每50-100mg组织加1ml裂解液RZ，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液RZ体积的十分之一。
b．单层培养细胞：直接在培养板中加入裂解液RZ裂解细胞，每10cm2面积加1ml RZ。用取样器抽打若干次至溶液透明。
  注意：裂解液RZ的加入量根据培养瓶面积决定，不是由细胞数决定。如果加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
c．细胞悬液：离心取细胞，弃上清。每5-10×10⁶动物细胞和植物细胞加入1ml裂解液RZ。加裂解液RZ前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
d．血液：直接取新鲜血液，加入3倍体积RZ（推荐0.25 ml血液＋0.75 ml RZ），充分振荡混匀。
2．将匀浆样品在15-30℃放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：4℃ 12000rpm （~13400×g)离心5 min，取上清，转入一个新的无RNase的离心管中。
  注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液中。
4．加入200μllǜ仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec，室温放置3 min。
5．4℃ 12000rpm （~13400×g)离心10min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，水相的体积约为所用裂解液RZ试剂的50%。把水相转移到新管中，进行下一步操作。
6．缓慢加入0.5倍体积无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱CR3，请分两次转入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃掉收集管中的废液。
7．向吸附柱CR3中加入500 μl去蛋白液RD（使用前请先检查是否已加入乙醇），4℃12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液，将CR3放入收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW（请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心30 sec，弃废液。
9．重复操作步骤8
10．将吸附柱放入2 ml收集管中，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心2 min，去除残余液体。
  注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT-PCR等实验操作。
11．将吸附柱CR3转入一个新的1.5 ml离心管中，加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2min，4℃ 12000rpm （~13400×g)离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。
  注意：如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。

根据您的关注的快捷型总RNA提取试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：植物RNA提取试剂盒2.0(无lǜ仿柱式提取)
货号：BTN160907
规格：50次
本试剂盒是无酚无lǜ仿柱式植物RNA提取试剂盒(BTN160906)的升级产品。不仅不需要lǜ仿处理，还解决了提取的植物总RNA中出现基因组DNA污染这一难题，提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。

试剂盒特点：
1. 免酚和lǜ仿处理，操作安全可靠。
2. 简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
4. 目前已测试过上百种植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 高于进口的柱式植物RNA提取产品。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反应液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脱液	10ml

储存条件：常温运输，4℃保存，DNase低温运输保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNA保存液中的植物组织需用纸吸去RNA保存液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，砚磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.室温12000～15000g离心3～5分钟，管底沉淀为细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 将一半的溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到同一离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL。
10. 12000rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的通用洗柱液会抑制后续反应中DNase的活性。
11. 将10μl(10 U)的RNase-free DNase 加入到50μl 37℃预热的DNA膜反应液中，吹打混匀配制成DNase工作液。
12. 将DNase工作液在37℃预热1分钟，然后全部加入到离心吸附柱中，室温放置5分钟。注意：5分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA 没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质抑制了DNase的活性)，此步的保温时间可以适当延长到10分钟或15分钟。
13. 直接在离心吸附柱中加0.7mL 通用洗柱液，盖上盖后颠倒数次混匀。
14. 12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
15. 再加0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
16. 12000rpm室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响RNA的使用。
17. 将离心吸附柱转移到RNase-free 收集管中，加入30-50μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
18. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
19. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
20. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
21. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

关注快捷型总RNA提取试剂盒，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：


BTN3060 非冻型组织RNA保存液 250mL
BTN3070 动物RNA提取试剂(TRIzol) 100mL
BTN71202 血液RNA柱式提取试剂盒 50次
BTN90904 膜结合DNA清除试剂盒 50次
BTN80918 Tris盐酸溶液(1M,pH8.5)(RNase-free) 250mL
BTN100935 超纯水 250mL
BTN100805C 酸酚-lǜ仿-异戊醇混合液(RNA提取用) 250mL
WE0198 动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I) 50次

如果您觉得“WH0063 快捷型总RNA提取试剂盒”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从给览网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.geilan.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8535750.html
已经有1200位访客查看了本页.