ALH608 细胞凋亡检测试剂盒

细胞凋亡检测试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要细胞凋亡检测试剂盒等DNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI双染)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI双染)
英文名称：Apoptosis detection kit (Annexin V-FITC probe)
产品货号：ALH608
产品规格：25次|50次

本试剂盒以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。

Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。

试剂盒组份：
Annexin V-FITC(20ug/ml)————————500ul
Binding Buffer—————————————20ml
Propidium Iodide(PI)(50ug/ml)—————125ul

注意事项
1. 为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项；
2. 试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落；
3. Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用；
4. 此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断；
5. 本试剂盒中提供的PBS 为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。

储存条件：2～8℃，有效期12个月。

本制品别名：凋亡细胞检测试剂盒

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货号	名称	规格
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名称：柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)
货号：BTN80803
规格：50次
线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化。本试剂盒克服了上述缺点。

产品特点：
1. 不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。
4. 注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。

产品组成：

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存zuì好放4℃。

使用方法：

一：培养细胞预处理
1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二：组织细胞预处理
3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小zuì好)，转移到1.5mL塑料离心管中，用于mtDNA提取。注意：zuì好不要使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。
三：血液预处理
4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
5. 用自备PBS洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四：mtDNA提取
5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350μL冰浴的溶液C，温和混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后放冰上放置20-25分钟。
9.室温12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
11.室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
16.室温12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
18. 12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现专一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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