SY0557 二乙酸荧光素(596-09-8)

北京百奥莱博供应的二乙酸荧光素(596-09-8)用于科学研究，我公司的二乙酸荧光素(596-09-8)品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括二乙酸荧光素在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：二乙酸荧光素
英文名称：Fluorescein diacetate(FDA)
产品货号：SY0557
产品规格：1g|5g

Fluorescein diacetate即FDA，中文名为二乙酸荧光素，是一种具细胞膜渗透性的酯酶底物，常用作细胞活力分析。不仅可以测定酯酶活力，因FDA需要在酯酶的催化下才能活化产生绿色荧光；而且还可用来鉴定细胞膜完整性，只有在完整膜内才能维持荧光。也可用于流式分析。zuì大激发波长（Ex）和发射波长（Em）分别为490nm和526nm。

另外，FDA还有一些其他用途：
1）细胞内相互作用研究；
2）作为底物，用于组织化学酯酶检测；
3）用于分离的肝细胞中线粒体电位研究等。

英文别名：Cellstain-FDA; 3,6-Diacetoxyfluoran; Di-O-acetylfluorescein;
中文别名：荧光素二乙酸酯；二乙酸荧光素酯；荧光素双醋酸酯；
CAS：596-09-8
分子式：C24H16O7
分子量：416.39
熔点：204-210℃
纯度：＞98%（HPLC）
溶解性：溶于氯fǎng，DMSO，乙醇，微溶于水
储存条件：-20℃避光干燥。
结构式


注意事项
1）对于微量试剂，开封前，请稍微离心一下，以保证粉末落入管底。
2）由于Calcein-AM对湿度非常敏感，本粉末保存的过程中一定要保持干燥。对于配制好的Calcein-AM储存液需要分装冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

根据您的关注的二乙酸荧光素(596-09-8)， Di-O-acetylfluorescein，Di-O-acetylfluorescein，Cellstain-FDA，3,6-Diacetoxyfluoran，?3,6-Diacetoxyfluoran，您可能还对以下产品有需求：


BTN90605C TdT加尾法DNA地高xīn标记试剂盒 5次
BTN9060 TdT加尾法DNA探针标记试剂盒 5次
BTN120653A 填入法DNA末端标记试剂盒 5次
BTN120653C 填入法DNA末端标记试剂盒(地高xīn标记dUTP) 5次
BTN121110 超快DNA-RNA两用转膜试剂盒 5次
BTN91104A Denhardt溶液(同位素探针) 250mL
BTN130907 脱脂奶粉 50g
BTN8091 超级杂交液(不含甲酰胺) 100mL

关注二乙酸荧光素(596-09-8)， Di-O-acetylfluorescein，Di-O-acetylfluorescein，Cellstain-FDA，3,6-Diacetoxyfluoran，?3,6-Diacetoxyfluoran的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：



名称：5′末端同位素标记试剂盒
货号：BTN131036
规格：20次
本产品为DNA 5′末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5′末端进行标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5′末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5′末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5′末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5′-end)的比活性。

试剂盒组份：

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5′磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5′末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5′末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用苯酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/氯fǎng、3 M NaCl 、乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/氯fǎng/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(zuì终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5′末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5′-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5′末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：


如果您觉得“SY0557 二乙酸荧光素(596-09-8)”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从给览网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.geilan.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8533574.html
已经有1064位访客查看了本页.