QN4102 葡聚糖凝胶G-75

葡聚糖凝胶G-75由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化实验研究等领域，我公司专注于分离试剂类产品的研发、生产和供应，为您提供的葡聚糖凝胶G-75质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括葡聚糖凝胶G-75在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：葡聚糖凝胶G-75
英文名称：Sephadex G-75 medium
产品货号：QN4102
产品规格：25g|100g|500g

葡聚糖凝胶G-75利用分子筛作用，进行多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定。

葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。 G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。 葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。 另外，粗级也可用于批量工艺。

葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。 它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖昔键被水解。 长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

葡聚糖疑胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。 干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。 葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。

性状：白色微球，多孔
凝胶类型：凝胶过滤填料，亲水型凝胶
结构成分：交联右旋糖酐
粒径：40～120µm
工作pH值：pH2～10
操作温度：4～40℃
球蛋白分离范围：3000～80000
保存条件：4～25℃

使用方法：
1．葡聚糖凝胶预处理：
在室温下，将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，或者用蒸馏水煮沸至少1小时直至充分溶胀，凝胶体积不再变化。
注：在溶胀前，加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降，沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多，需要重复多次漂洗将其除去，防止层析时阻塞凝胶柱，影响流速。
2．装柱：
将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；装柱要均匀，可在凝胶耐受的操作压下装柱，装好的凝胶柱可以检测柱效，检测过滤柱装填是否合格。
凝胶层析分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度：分级分离时，一般需要100cm左右长的层析柱，柱高与直径之比为20～100:1，柱高过高时，凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压，应当尽可能避免；分组分离（例如脱盐）时用短柱，柱高控制在40～50cm以下，柱高与直径的比约为5～10:1。
3．平衡：
上样前用平衡液平衡层析柱至少3～5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；
4．上样：
分级分离时上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1～2%的床体积，视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积。
样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去，样品的粘度不能过高，否则影响分离效果。
5．洗脱方法:
可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；
6．在位清洗(CIP)
凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向清洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
7．保存
凝胶柱暂时不用，可将其回收，一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干，可加入0.02%叠氮化钠防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生长。

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货号	名称	规格
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名称：DEAE-葡聚糖凝胶A-25
货号：QN3990
规格：25g|100g|500g

名称：镍-琼脂糖凝胶6FF
货号：QN4044
规格：5ml|10ml|25ml|100ml
Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得.它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6×His可与Ni2+螯合，从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。该纯化介质与His标签蛋白具有高的亲和力，可达5-20mg/ml。可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95％。Ni-NTA可再生4-6次，重复使用。本产品悬浮液为20％乙醇，已螯合Ni2+。操作方法：

别名：镍-琼脂糖凝胶6FF镍琼脂糖凝胶镍柱
储存条件：4℃保存，有效期至少一年

A.非变性条件下抽提His标签蛋白

1)准备细胞，接种，诱导表达。收集细胞，置于-70℃或立即进行步骤2操作。

2)加入1/20细胞生长体积的NTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1mM现用现加。

3)将细胞悬浮起来，加入溶菌酶，混匀，冰上放置30分钟，超声或匀浆破碎细胞。该步骤冰上操作。

4)加入10% Triton X-100,使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。

5)12000 rpm/min(20,000×g以上)，4℃离心15分钟以上。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。

6)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗。

7)将样品加至NTA层析柱中，流速在15ml/h左右，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的结合情况。

8)层析用5倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。

9)分别用5倍NTA体积的NTA-20、NTA-40、NTA-60、NTA-80、NTA-100、NTA-200、NTA-1000 Buffer洗脱，流速控制在15ml/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。

10)确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。zuì为有效的方式是SDS-PAGE分析。也可以用Bradford蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。

11)纯化的目标蛋白质的保存条件需要根据蛋白质的性质和用途确定。NTA-0、20、40、60、80、100、200、1000Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9,0.5M NaCl,10% Glycerol，添加0、20、40、60、80、100、200、1000 mM Imidazole。

B.变性条件下从包涵体中纯化His标签蛋白

1)准备细胞，接种，诱导表达。收集细胞，置于-70℃或立即进行步骤2操作。

2)加入1/20细胞生长体积的GuNTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1mM现用现加。

3)将细胞悬浮起来，冰上超声破碎细胞，降低粘稠度。

4)室温放置30分钟，间或混匀或用磁力搅拌。

5)12000转/分（20,000×g以上），4℃离心15分钟以上。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。

6)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗。

7)将样品加到NTA层析柱中，流速控制在15ml/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。

8)层析用5倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。

9)分别用5倍NTA体积GuNTA-20、GuNTA-40，GuNTA-60、GuNTA-100、GuNTA-500洗脱，流速在15ml/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。

10)确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。zuì为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。

11)目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。

12)纯化的目标蛋白质需要复性，复性常用的手段可以参考有关手册确定的原则。

GuNTA-0、20、40、60、100、500Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9,0.5M NaCl,10% Glycerol,6 M Guanidium HCl添加0、20、40、60、100、500 mM Imidazole。

C.NTA树脂的再生

NTA树脂在使用若干次数（3-5次）后，结合效率有所下降，可以用以下方法再生，提高树脂的使用寿命和蛋白质的结合效率。

NTA树脂再生前需要从层析柱下端流干所有溶液，估计出NTA的树脂体积，按下列次序将再生试剂加到层析柱里，在等上一步再生溶液流干后，再加下一步再生溶解。

用户需要自行准备25%、50%、75%、（v/v）乙醇和去离子水。从层析柱下端流干所有溶液，用2倍NTA树脂体积的Stripping Solution I、2倍体积的去离子水、3倍体积的Stripping Solution II、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的75%乙醇、5倍体积的乙醇、1倍体积的75%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的去离子水、5倍体积的Stripping Solution III、3倍体积的去离子水分别洗一遍。

如果立即使用，用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗；如果想长期储存，加入1倍体积的20%乙醇，4℃保存，使用前用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗

再生溶液配方：Stripping Solution I:  6M GuHCl,0.2M acetic acid。Stripping Solution II: 2% SDS。        Stripping Solution III: 100 mM EDTA,pH 8.0。Ni Charging Solution: 100 mM NiSO4

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