BTN101114 通用型RT-LAMP恒温扩增试剂

通用型RT-LAMP恒温扩增试剂是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，本品质量稳定，价位合理，需要通用型RT-LAMP恒温扩增试剂等核酸扩增(PCR)产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒
英文名称：Universal Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification Kit
产品货号：BTN101114
产品规格：50次

本试剂盒可以用于RT-LAMP等温扩增，RT-LAMP即逆转录和Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增)的结合，专门用于快速扩增RNA。LAMP是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4或6条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于RT-PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点：
1.高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比RT-PCR更高。
2.高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的RNA分子
3. 65℃左右完成RT和LAMP扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板RNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

试剂盒组成：

成分	规格
RT-LAMP Mix(2×)	0.5ml
AMV-Bst混合液	75μl
对照引物混合物	40μl
对照模板	5μl
MgCl2(25mM)	0.2ml
RNase-free水	1ml
说明书	1份

注：RT-LAMP Mix(2×)稀释到1×时，已经有8mM Mg2+，本试剂盒提供的MgCl2(25mM)用于用户优化条件用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
RT-LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
自备FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备模板 RNA	1-100ng	不加
AMV-Bst 混合液	1.5μl	1.5μl
补水到	20μl	20μl

 注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL)，则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则zuì好保温120分钟；如果使用Loop引物，则zuì好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。此酶有外切酶活性，所以必须灭活。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。
5. 结果分析：
a)如果没有扩增，则需要用本试剂提供的阳性对照进行扩增。本试剂盒提供阳性对照，反应按下表设置：

成份	阳性对照管
RT-LAMP Mix(2×)	10μl
对照引物混合物	4.0μl
对照模板	1μl
AMV-Bst 混合液	1.5μl
水	3.5μl

 混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以zuì好保温120分钟。
b)如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家联系。

注意事项：
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成10.浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。

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货号	名称	规格
BTN80205	DMSO，PCR级	1.5mL
BTN101005	即用型易错PCR试剂盒	100次
YT376	PCR Buffer套装(用于PCR优化)	5ml
YT401	核酸酶/DNA清除剂(喷雾清除剂)	250ml
WE0104	2×Bes Taq MasterMix(含染料)	1ml|5ml|25ml
WE0126	防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)	1ml

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名称：25mM氯化镁溶液(PCR级MgCl2溶液)
货号：BTN90302
规格：5mL
本产品为专门用于PCR的MgCl2，其浓度为25mM，可以用于调节MgCl2的zuì佳浓度。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：免DNA提取PCR试剂盒(细胞组织裂解物直接PCR试剂盒)
货号：BTN130985
规格：100次
本产品是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行PCR扩增的试剂盒。

产品特点：
1. 操作简单，免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步骤，5分钟即得用于PCR的模板。
2. 兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3. 提供离心管专用研磨杵，便于处理棘手样品。
4. 环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
5. 尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
6. 本试剂盒可以处理100份不同的样品，足够100次PCR实验。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	12ml
溶液B	12ml
PCR MagicMix 3.0	1ml
研磨杵	100只
说明书	1份

储存条件：溶液A、溶液B和离心管专用研磨杵可以常温和放置，PCR MagicMix 3.0需要低温运输、-20℃保存。有效期一年。

使用方法：
1. 次使用本产品时需要详细检查溶液A和溶液B是否有结晶析出。如果有需要37℃溶解后摇晃均匀待用。未用完部分可以放常温保存。
2. 根据材料不同参考下表取少量样品到1.5mL塑料离心管中。

样品种类	取样量
动物组织	1-5mg
鼠尾	2mm长
血液样品	不超过20μl
植物叶片	1-5mg
植物种子(去皮)	1-5mg
酵母培养物	0.2-0.5mL培养物沉淀
细菌培养物	0.2-0.5mL培养物沉淀

注意：未列出样品，用户需要自己摸索zuì佳用量。对富含多醌多酚的植物材料(如棉花)，组织使用量zuì好不要超过0.5mg。
3. 加入100μl溶液，确保溶液A完全将样品淹埋。
4. 用研磨杵小心将样品在离心管内捣碎。血液一般情况捣碎30秒即可；实体组织需要捣碎到溶液的颜色变浑浊(植物叶片的话，溶液的颜色将变成绿色)。如需更多研磨杵，可从我司另购。对棘手的样品，还可以增加95℃保温10-60分钟一步，待温度冷却到室温后再进入下一步。残留的实体组织碎片不会影响后续试验。
5. 加入100μL溶液B，震荡10秒混匀。
6. 常温12000rpm离心2分钟。
7. 将上清液转移到一个干净的1.5mL离心管中。如果不用，可以放-80℃长期保存。如果用于后续PCR，请直接进入下步。
8. 直接用裂解液作为模板设置30μl体系的PCR反应体系如下：

成分	用量
PCR MagicMix 3.0	15μl
细胞裂解液(来于上步)	1-5μl
自备PCR引物1(10uM)	1μl
自备PCR引物2(10uM)	1μl
补水到	30μl

注意：裂解液体积zuì好不要超过PCR体积的1/10。如果需要增加模板的加入量，则PCR体系应该相应的增加。如果加入5μL裂解液，则可以使用50μL的PCR体系。
9. 放入PCR仪中进行PCR,PCR参数需要根据引物Tm值和靶分子长度等参数设置。一般不低于35次循环。
10. PCR结束后取5-10μL直接上样电泳(本产品不需要上样液)，红色染料电泳速度相当于50bp DNA片段。

注意事项：
1．如果反应体系不是30μl，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果细胞裂解液中有不明PCR抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物)，可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804，30μL体系中加3μL)，可能会对PCR有帮助。

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