SV1098 拓扑异构酶 I（E. coli）

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特别提示：包括拓扑异构酶 I（E. coli）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：拓扑异构酶 I（E. coli）
英文名称：Topoisomerase I (E. coli)
产品货号：SV1098
产品规格：500U|100U

特性:
识别错配 DNA
催化负超螺旋 DNA 松弛
概述:
拓扑异构酶 I（E. coli）催化负超螺旋 DNA 的松弛。拓扑异构酶 I 也参与 DNA 螺旋化的形成和解旋以及将两条互补的单链 DNA 环耦合为双链 DNA 环。完整的全酶分子量为 97 kDa。
来源:
克隆有 topA 基因的重组 E. coli 菌株。
反应条件:
1X CutSmart 反应缓冲液
[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，100 μg/ml BSA（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。
质保声明:
拓扑异构酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有zuì高的活性和纯度。详情请联系我们咨询。
单位定义:
1 单位指在 25 μl 反应体系，37℃ 条件下，15 分钟内能催化超过 95% 的 0.5 μg pUC19 RF I 型（负超螺旋）DNA 松弛所需要的酶量。DNA 超螺旋化通过不含溴化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。
浓度:
5,000 units/ml 和 15,000 units/ml。

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货号	名称	规格
YT394	M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶)	2000U|10KU|50KU
WE0224	RNase A溶液(10mg/ml)	1ml
SV0033	AhdI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0038	AluI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0097	BanII限制性内切酶	10KU|2KU|1KU
SV0114	BciVI限制性内切酶	1KU|200U
SV0260	BstNI限制性内切酶	15KU|3KU|1500U

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名称：Tth DNA聚合酶
货号：BTN90501
规格：250U
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应，但耐热性比Taq酶高，因此对高GC含量模板的PCR 也有较好的效果。本酶基本上没有3′→5′外切酶活性及5′→3′外切酶活性，所以也可用于双脱氧法测序。另外，本酶具有RTase活性，在Mn2+存在的情况下，RTase活性会得到强化。利用该特性，可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应，即一步法RT PCR。(但是，在Mn2+存在时，RT-PCR的准确性不高)此外，本酶与Taq DNA多聚酶一样，PCR产物可通过T载体进行TA克隆。

产品特点：
1．RT-PCR反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性。
2．二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题。

产品组成：

成分	规格
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	50μl
10×Tth Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
以λDNA为模板，以10×Tth Buffer(+MgCl2)作为缓冲液进行体积为50μL的PCR扩增反应为例

1．按下列组份配制PCR反应液。

成分	终浓度	用量
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	1.25U	0.25μl
10×Tth Buffer(+MgCl2)	1×	5μl
dNTP Mixture(各2.5mM)	各0.2mM	4μl
模板DNA	50pg～1μg	详见下表
引物1(10μM)	0.1～1μM	zuì多到1μL
引物2(10μM)	0.1～1μM	zuì多到1μL
灭菌蒸馏水		加到50μL

推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量：

哺乳动物基因组DNA	0.5～1μg
酵母基因组DNA	5～500ng
细菌基因组DNA	0.5～50ng
质粒DNA	5～500pg
PCR回收片段	1～100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1．循环测序：该酶为耐热性酶，可通过与PCR 同样的温度条件进行测序反应。由于其高温稳定性好，对于复杂结构的模板效果较好。
2．引物：用于耐热性酶测序的引物需比用于非耐酶测序的引物设定更长的时间。采用较短的引物时，可能会出现不能获得条带变淡的情况。

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