WE0325 Annexin V-FITC/P

北京百奥莱博供应的Annexin V-FITC/P用于生化实验研究等领域，我公司的Annexin V-FITC/P品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
英文名称：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
产品货号：WE0325
产品规格：50次

  本试剂盒是一种采用Annexin V-FITC与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
  细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色， 因此通常将Annexin V与PI配合染色， 以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

试剂盒组成：

组份	50次
4×Binding Buffer	10ml
Propidium Iodide，PI	500μl
Annexin V-FITC	250μl

注意事项：
1、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2、需自备PBS和去离子水。
3、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4、PI对人体有刺激性，请注意适当防护。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：
1、细胞样品的准备：

a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

2、用去离子水按 1:3 稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去离子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为 1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加 400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。

实验图例


储存条件：2～8℃，避光保存

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名称：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)
货号：YT137
规格：20次|50次
本试剂盒提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。本试剂盒足够检测20个样品。

试剂盒组分：
TdT酶———————————40μl
Biotin-dUTP————————960μl
TdT酶稀释液(选用)—————500μl
Streptavidin-HRP——————22μl
Streptavidin-HRP稀释液———1ml
DAB显色液A————————6ml
DAB显色液B————————6ml
标记反应终止液——————6ml

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3"-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，zuì后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。

本试剂盒有如下优点：
(1)高灵敏度：背景染色低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有 DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2)特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3)快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。

少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，zuì好同时检测多个凋亡指标。

注意事项：

1. 需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(YT097)等适当的封片液，用于固定的4%多聚甲醛或向百奥莱博订购免疫染色固定液(YT086)，同时需自备含0.1% Triton X-100的PBS或向百奥莱博订购免疫染色洗涤液(YT089)。 需自备过氧化氢，除石蜡切片外需自备甲醇。
2. 如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K，二甲苯。

储存条件：-20℃。

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