JN0114 全基因组扩增试剂盒

我公司致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白，包括全基因组扩增试剂盒在内的各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特别提示：包括全基因组扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：全基因组扩增试剂盒
产品货号：JN0114
产品规格：10次

  全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系，Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性，可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有的DNA合成能力，可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性，保真度高于大多数高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。
  本试剂盒可以实现少量DNA样本的全基因组无差别扩增，一个反应可以达到40ug的全基因组DNA。本试剂盒要求DNA样品不能严重降解，以减少因模板量太少造成不平衡扩增。扩增产物可以稀释后用于后续的DNA分析。

试剂盒组成：

组份	体积
10×BalbAmpBuffer	1ml
Primer mixture（1mM）	20ul
dNTPs（10mM）	200ul
100×BSA	100ul
BalbAmpPhi29 Enzyme	25ul
ddH2O	1ml

试剂盒特点：
1、高覆盖度：经过扩增后可达到95%以上覆盖度。
2、高均一度：无偏好扩增，可实现全基因组的均一扩增。
3、高保真：具有很强的校正功能，保真度高。
4、高灵敏：可实现少量样本的全基因组扩增。

实验方案：
1、配制以下反应体系：

试剂	体积
10×BalbAmp Buffer	5ul
Primer mixture（1mM）	1.25ul
模板	1ul
加ddH2O至	45ul

2、95℃预变性3min，然后冰上冷却。
3、加入以下成分：

试剂	体积
dNTPs(各10mM)	2.5μl
100× BSA	0.5μl
BalbAmpPhi29 Enzyme

4、30℃反应3h或者过夜。
5、扩增产物是高浓度基因组DNA，需要将扩增产物用无菌水或者TE缓冲液进行稀释后进行下游实验。

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货号	名称	规格
YT395	cDNA链合成试剂盒(RNase H-)	10次
WE0102	2×Taq MasterMix(含染料)	1ml|5ml|25ml
WE0111	BaldStar Taq DNA Polymerase	500U|2500U
WE0136	SuperSYBR Mixture(不含ROX校正染料)	1ml|5ml
SY0024	常规Taq DNA聚合酶	1000U
SY0051	矿物油	100ml

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名称：即用型高保真PCR试剂盒
货号：BTN90708
规格：1.5mL
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液，含有除引物、模板以外的所有PCR试剂，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等，特别适合于高保真PCR反应。

产品特点：
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

使用方法：
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL，各成分需要按比例增加或减少。

试剂		加入量
2×高保真PCR MagicMix		25μL
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500ng
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10-20pmol each
补水到		30μL

参考扩增条件：

预变性	94℃	4min
PCR(30个循环)	94℃	30s
	50℃	30s
	68℃	0.5kb/min
延伸	68℃	10min

注意事项：
1. 本产品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反应速率低，因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb 需2 分种。
2. Pfu酶3′-5′外切酶活性可降解引物，所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后，立即放入PCR 仪中进行扩增，扩增完毕后立即进行电泳检测。
3. 本产品扩增产物为平末端，不可以直接进行TA 克隆，可以使用ClionB载体(BTN51104)进行克隆。如需要进行TA克隆，建议对PCR产物纯化后，用加A 试剂盒(BTN60105)加A后再进行TA克隆。
4. 由于Pfu 无 5′到 3′外切酶的活性，所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。

疑难解答：
Q：为何Pfu DNA Polymerase扩增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3′-5′的外切活性，所以在合成过程中，该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对，影响了合成效率；二是它能通过3′-5′的外切活性使引物部分降解，降低引物结合模板的能力，进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本产品时还有哪些注意事项？
A：1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR 长和高(考虑到被Pfu DNA Polymerase的3′-5′的外切活性降解的因素)；
 2.zuì好在反应前加Pfu DNA Polymerase。

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