ZN1926 ECM Kit(兔IgG)

ECM Kit(兔IgG)由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，ECM Kit(兔IgG)是我司众多优质免疫检测之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括ECM Kit(兔IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：ECM Kit(兔IgG)
产品货号：ZN1926
产品规格：1盒

用途：适于一抗为兔IgG的Western Blotting 检测。
保存条件：4℃可保存一年 。
Western Blotting 检测试剂盒内容：
1.封闭试剂：10g 蛋白质干粉(脱脂奶粉)。
2.HRP 标记羊抗兔IgG：0.1ml 亲和纯化抗体，经过人血清吸附以去除交叉抗体。
效价 1：2000-10000。
3.ECM 显色剂：总量 10ml。含 A 液 5ml(×20倍)；B 液 5ml(×20倍)。每个试剂盒足够 10 张小膜或800 c ㎡面积的膜显色。
工作原理：
蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下 ,向着与其电荷相反的电移动的现象。根据所采用的支持物不同,可分为：琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。其中以聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)zuì广泛。它的优点为：无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出 10-9-10-12mol的样品,
凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶。SDS-PAGE 是zuì常用的定性分析蛋白质的电泳方式,它根据蛋白分子大小不同，迁移速率的不同而达到分离目的，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。
免疫印迹是将凝胶电泳的高分辨力和免疫化学检测的特异性融为一体。免疫印迹技术先借助凝胶电泳将蛋白质抗原分离，然后将凝胶中的蛋白质转印到膜上使之成为被分离的一个拷贝。免疫印迹为检测样品中是否存在目的蛋白提供一种可靠的方法，该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特异性抗体结合的特性并通过相对迁移率来体现该蛋白的分子量。
如果想要了解样品中是否存在某一抗原，以及该抗原的含量或该抗原多肽链的相对分子质量以及亚型，是否与其他蛋白结合，蛋白质的酪氨酸残基是否发生磷酸化等有关问题均可采用免疫印迹。
免疫印迹包括多个简单步骤，可在一到两天完成，该方法具有，简便，灵敏等特点。
实验操作步骤：
1．蛋白质的样品制备：
1)细胞培养蛋白质样品的制备：
1：胰酶消化后裂解：细胞培养至 80%左右密度时，以含 0.25%胰蛋白酶消化,室温，低速离心，弃上清。细胞经预冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)反复吹打。
2：皿上直接裂解：细胞培养至 80%左右密度时，细胞经预冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)，用细胞刮刀收集，转移至离心管中，反复吹打。
2)组织样品的制备：新鲜组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，按组织净重：裂解液=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆，离心收集上清(如有粘稠物可超声处理)
3)蛋白变性：处理后的样品加入样品缓冲液(按样品浓度 1：1或1：2的比例)混匀，样品置 1000C的水浴箱加热 3-5分钟，10000g 离心 10分钟，取上清液。(样品可立即使用也可以分装冻存，-20℃可稳定保持数月。)
2．SDS-PAGE 电泳：
1)．制 胶：①按比例配制分离胶(丙烯酰胺母液：单体：双体=29：1)，缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃中，再在液面上小心注入一层水或正丁醇，以阻止氧气进入凝胶溶液中，37℃恒温箱中静置 60min。
②同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多的氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，以连续平稳的液流注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，37℃恒温箱中静置60min 以上以保证完全聚合。
2)加 样：依次加入标准品和待分析样品。(加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。样品一般在 1.0mm 厚6、显色(ECM)ECM 显色剂配制:按 1ml 蒸馏水，加显色剂 A、B 各 1 滴混匀。将杂交后印迹膜放入显色盒中,加上混合好的显色液反应约 1-5分钟。吸去印迹膜边缘显色液,将一透明的玻璃纸盖住抚平,以确保×感光胶片的干燥。印迹膜转入暗室中使胶片曝光 30＇-5分钟。
7、显影，定影。 将曝光后的×感光胶片放入显影液中冲洗至胶片上出现条带或者胶片透明为止,再放入定影液中定影，胶片可长期保存。

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货号	名称	规格
YT084	冰冻切片快速抗原修复液(5X)	100ml
ZN1882	彩色预染超低分子量蛋白质标准(10-20次)	100μl
ZN1901	丽春红染色液(1×)	100ml
ZN1945	多聚赖氨酸 Poly-L-lysine	10ml
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ZN1953	TBS漂洗缓冲液	1包
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名称：Western半干法转膜液
货号：YT064
规格：1L|10×1L
本品可以用于Western时半干法电转膜。本Western半干法转膜液是一种安全的转膜液，没有使用剧毒的甲醇，也没有使用其它的有毒试剂。配制Western 半干法转膜液的方法非常便捷，不需要调节pH值。本Western转膜液共1瓶，可以配制1升Western半干转膜液。

注意事项：
1. 配制好的半干法转膜液可室温或4℃保存。配制好的半干法转膜液长期存放后，如果颜色变成浅棕色或黄褐色，应丢弃。
2. 需使用分析纯级别的乙醇或纯度更高的乙醇。

储存条件：室温，有效期两年。

名称：抗荧光淬灭封片液
货号：YT097
规格：5ml
本品是一种用于减缓荧光淬灭的封片试剂。可以用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭。操作简单，在封片时用移液器滴一滴抗荧光淬灭封片液在样品上，盖上盖玻片即可完成操作。按照每个样品封片需要50微升计算，足够用于100个样品的封片。

注意事项：
1. 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。可以向百奥莱博选购各种型号的载玻片存储盒。
2. 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：抗荧光淬灭封片液(强)
货号：YT098
规格：5ml
本品是一种用于减缓荧光淬灭的封片试剂。可以用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭。本抗荧光淬灭封片液在使用前需把抗荧光淬灭试剂加入到抗荧光淬灭试剂溶剂中，充分溶解并混匀后即可使用。配制好的抗荧光淬灭封片液可-20℃避光保存至少3个月。操作简单，在封片时用移液器滴一滴配制好的抗荧光淬灭封片液在样品上，盖上盖玻片即可完成操作。按照每个样品封片需要50微升计算，足够用于100个样品的封片。

注意事项：
1. 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2. 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
3. 需把抗荧光淬灭试剂一次性全部加入到抗荧光淬灭试剂溶剂中，充分溶解并混匀后方可使用。

名称：封闭液(用PBS配置，不含去垢剂)
货号：YT871
规格：100ml
本品是zuì新一代的快速封闭液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液及国外同类产品，可以用于Western blot (WB)、Immunofluorescence (IF)、Immunohistochemistry (IHC)、Immunocytochemitry (IC) 等实验中的封闭、一抗或二抗的稀释。本产品配制在PBS中，不含去垢剂。按照每张膜封闭需要5-10ml封闭液计算，一个包装的本产品 可以封闭10-20张膜。


本封闭液快速。封闭时间通常仅需5-15分钟，并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭液以及国外同类的快速 封闭液相比，显示出更强的信噪比(参考下图)。

本封闭液封闭后背景低。本封闭液不含血清和白蛋白，确保高的信噪比。

本封闭液兼容性好，兼容辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂，不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素，不会干扰基于生物素的检测。
本封闭液使用灵活。本产品配制在PBS中，可以直接用于相关实验，但也可以根据实验需要自行添加Tween-20或Triton X-100 至终浓度为0.05%-0.1%后用于封闭、一抗或二抗的稀释。

本产品与BSA及国外同类产品的封闭效果对比参见下图。在相同样品和实验条件下，仅封闭液及封闭时间存在如下图所示的差异时，我公司的本封闭液封闭后的整体背景明显低于BSA封闭后的背景，而且目的条带亮度明显高于国外同类品牌产品。


每组实验从左到右依次为：5μl蛋白Marker，2.5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液，5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液。请注意对于抗体A，本封闭液比BSA和国外同类产品具有更低 的背景，并且和国外同类产品相比信号明显更强。对于抗体B，本封闭液比BSA具有更低的背景，和国外同类产品相比信号明显更强。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

注意事项：
1. 本产品推荐仅使用一次，重复使用可能会导致封闭效果下降。但对于一些信噪比很高的一抗，例如一些内参抗体，本封闭液可以重复使用2-3次。回收的封闭液请勿与未使用 过的封闭液混合。
2. 通常本产品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5-15分钟。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。此外，如有特殊需要，也 完全可以4℃封闭过夜。
3. 由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
4. 取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子，并仅轻轻夹取其边角，操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
5. PVDF膜一经浸润和活化，需一直保持湿润，根据Western进行到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中，否则可能会产生难以封闭的异 常背景。
6. 在背景较高的情况下，为进一步提高信噪比，本产品中可以自行添加Tween-20或Triton X-100至终浓度为0.05%-0.1%。

储存条件：4℃，有效期一年。

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