SY0044 脱氧鸟苷三磷酸溶液

脱氧鸟苷三磷酸溶液是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，脱氧鸟苷三磷酸溶液是我司众多优质核酸扩增(PCR)之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括脱氧鸟苷三磷酸溶液(100 mM)(dGTP)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：脱氧鸟苷三磷酸溶液(100 mM)(dGTP)
英文名称：dGTP Solution(100 mM)
产品货号：SY0044
产品规格：400μL

dGTP即2’-deoxyguanosine 5’-triphosphate，中文名为脱氧鸟苷三磷酸，常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA合成、引物延伸反应、DNA测序、DNA标记等各种常规分子生物学反应。

本产品为溶液钠盐形式，用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，浓度为100mM。

经检测，dGTP纯度大于99%（HPLC），且无DNase和RNase污染。本产品为即用型，可以直接用于PCR等各种常规分子生物学反应。

注意事项
1)可以室温溶解，溶解后宜存放于冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即置于-20℃保存。
2)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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名称：DNA Shuffling试剂盒
货号：BTN131178
规格：10次
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物)，zuì后再进行常规PCR(外加引物)等处理，zuì后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下：


产品特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化，1-2天即可完成，节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

试剂盒组成：

成分	规格
PCR Mix 3.0，2×	1.5mL
DNase I溶液(1U/μL)	10μl
溶液A，10×	60μl
溶液B，10×	60μl
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。

使用方法：
1.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb，同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段，则彼此的比例为1:1)，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。zuì后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴，同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制，方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中，按顺序加入下列成分：

成分	用量
待突变基因片段(第1步制备)	2μg
溶液A	5μl
溶液B	5μL
DNase I工作液(第2步制备)	2μL
超纯水	36μL

4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意：一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围，zuì好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA，否则UV使DNA发生的交联将大降低后续扩增效果。
6.分光光度法测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行轮无引物PCR：

过程	温度	时间
PCR前变性	94℃	150s
PCR反应(40循环)	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	10s，每次循环后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

9.取5-10μl进行电泳检测，然后进行PCR回收，得到轮PCR产物。
10.将回收的轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。

成分	用量
回收的轮PCR产物	1μL
PCR Mix 3.0，2×	50μL
自备DNA Shuffling引物	各1μM
超纯水	加水到100μL

11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。

过程	温度	时间
活化	94℃	150s
PCR反应(25次循环)	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	60s，每次循环后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

12.电泳检测，回收预期大小的PCR产物，用于后续的构建克隆文库实验(略)。

疑难解答：
Q：易错PCR和DNA Shuffling有何区别？
A：前者引入的是点突变，后者引入的是重组突变。示意图如下：


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货号	名称	规格
BTN61203	PCR级高GC的DNA清除剂	1.5mL
BTN90408	即用型荧光定量PCR试剂盒	1mL
BTN130911	miRNA cDNA链合成试剂盒	25次
BTN100814	Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)	5μg
YT379	PCR试剂盒(含Taq酶，Buffer，dNTP，上样液)	400次|2000次
YT388	dTTP溶液(100mM)	250μl

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