SV0619 PstI-HF限制性内切酶

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特别提示：包括PstI-HF限制性内切酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PstI-HF限制性内切酶
英文名称：PstI-HF Restriction Endonuclease
产品货号：SV0619
产品规格：50KU|50KU|10KU|10KU|5KU

在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer:
特性:
CutSmart、重组酶、基因工程改造酶、省时酶、高保真酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
浓度:
20,000和100,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。

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货号	名称	规格
BTN130655	热敏磷酸酶	500U
YT512	末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)	500U
SV0004	AbaSI限制性内切酶	1KU
SV0030	AgeI-HF限制性内切酶	1,500U|300U
SV0032	AgeI-HF RE-Mix	25次
SV0055	ApoI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0082	BaeI限制性内切酶	1250U|250U

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名称：MMLV逆转录酶
货号：BTN60905
规格：10000U
该酶是突变型的MMLV逆转录DNA聚合酶，从表达莫洛尼氏鼠白血病病毒reverse transcriptase基因(pol基因)的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为76.1KDa的单亚基组成，可催化以单链DNA、RNA或DNA:RNA杂交链为模板的互补DNA链的聚合反应。跟野生型相比,它没有RNase H活性。

产品特点;
1．延伸性能好，可合成长达12.5 Kb的fμLl-length cDNA。
2．zuì佳反应温度为42℃，但在50℃时仍然有活性，70℃10分钟能使其失活。
3．能以Cy3-，Cy5-，rhodamine-，aminoallyl-，fluorescein等标记的nucleotides 为底物。
4．可用于first strand cDNA 合成，second strand cDNA 合成，DNA labeling，RNA primer extension等。
5．与PCR 兼容，RT产物可以用于PCR和real-time PCR。
6．能被金属螯合剂，无机磷酸，焦磷酸和多胺抑制。
7．没有RNase H活性。

产品组成：

成分	规格
MMLV逆转录酶(200U/μL)	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有限期一年。

使用方法：

一、合成PCR用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
总RNA 或poly(A)mRNA 或专一的RNA	100-500 ng 10-500 ng 0.01pg-500ng
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 15-20pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟zuì后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。

二、合成建文库用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
poly(A)mRNA 或专一的RNA	1ug 0.5-1ug
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 100pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟zuì后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200 U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃。

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