ALH108 小量全血基因组DNA快速提取试剂

小量全血基因组DNA快速提取试剂由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，我公司的小量全血基因组DNA快速提取试剂品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括小量全血基因组DNA快速提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：小量全血基因组DNA快速提取试剂盒
英文名称：Whole blood genomic DNA extraction kit
产品货号：ALH108
产品规格：50次|200次

本试剂盒采用独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，zuì后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份（200次）：
缓冲液BB————————40ml
结合液CB————————60ml
抑制物去除液IR—————100ml
漂洗液WB————————50ml
洗脱缓冲液EB——————15ml×2
蛋白酶K————————80mg
吸附柱AC————————200个
收集管（2ml）—————200个

产品特点：
1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3-12µg，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
4.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全，客户可根据需要选择购买。
5.典型的产量200µl全血可提取出3-12µg 基因组DNA。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。
3. 需要自备异丙醇。
4. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
5. 为了zuì佳效果，zuì好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3 天的标本，不要使用反复冻融超过3 次的标本，否则会严重降低产量。
6. 洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH 大于7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在－20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

储存条件：室温，有效期12个月。

本制品别名：全血DNA快速提取试剂盒|少量全血DNA快速提取试剂盒

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货号	名称	规格
BTN60910	非冻型血液DNA保存液	250mL
BTN70502	石蜡包埋组织DNA提取试剂盒	30次
BTN60805	中草药DNA提取试剂盒	20次
BTN80201	一步法无内毒素质粒DNA提取试剂盒	50次
WE0185	血块基因组DNA提取试剂盒	50次
WE0189	高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)	10次|50次
WE0397	游离DNA样本保存管(5ml,PET)	5ml×5支|5ml×50支

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名称：非冻型血液DNA保存液
货号：BTN60910
规格：250mL
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可常温保存血液DNA 长达六个月，尤其适合于野外血液样品采集。
2. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA 无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)。
5. 安全可靠，本产品无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一: 哺乳动物血液(包括人血液)
1. 将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。
2. 加入等体积的血液DNAhold，充分振荡混合均匀。
3. 常温闭光保存直到使用。
4. 提取DNA时，可以取出部分液体，用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜，然后再用经典的酚/氯fǎng抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽类血液
由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物，血液的使用量很少，一般只有哺乳动物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释，然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。

名称：高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
货号：WE0189
规格：10次|50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、羊水、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的吸附柱和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本试剂盒使用负压法，同时配备延伸管，可处理多达5ml样本，纯化的DNA产量高、质量好，zuì大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	10次	50次
Buffer CL	45ml	220ml
Buffer CB(浓缩液)	60ml	300ml
Buffer GTL	15ml	60ml
Buffer GW1(浓缩液)	3ml	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	3ml	15ml
Buffer EBL	2ml	10ml
蛋白酶K	100 mg	3×180 mg
蛋白酶K 储存液	5ml	30ml
吸附柱DG及收集管	10套	50套
延伸管(20ml)	10个	50个
连接管	10个	50个
离心管(L-1.5 m l)	10个	50个

保存条件：吸附柱DG置于2～8℃，其他组分室温(15～30℃)

产品特点：
1、适合大体积样本：试剂盒使用负压法，配备延伸管，配套使用负压装置可将样品处理量提高至5ml。
2、提取得率高：使用微量吸附柱结合目的片段，有效提升核酸的回收率，洗脱体积可在10-150μl之间灵活变化，可浓缩低浓度核酸。
3、纯度高：经纯化和浓缩的游离DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可即用于下游各种应用，包括PCR、荧光定量PCR、二代测序等。

自备试剂：无水乙醇、异丙醇

实验前准备及重要注意事项：
1、向每管蛋白酶K *末中加入用量(10次加5ml/50次每瓶加9ml)的蛋白酶K 储存液，使其完全溶解后-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。其它组分可以在干燥、室温(15～30℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致DNA提取量下降。
3、本试剂盒zuì多可以从5ml血清血浆、4ml尿液中提取cfDNA。
4、次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
5、次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
6、使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解，混匀后使用。
7、实验开始前将水浴锅预热至60℃。
8、可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃。
9、负压装置。

操作步骤(血清、血浆样本1-5ml)：

1、样品处理：向离心管(自备)中加入1ml血清/血浆样本，若样本不足1ml，加入PBS溶液补至1ml体积。
注意：当样品量超过1ml时，请等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB试剂用量，具体
2、向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入800μl Buffer CL，剧烈震荡至少30秒。
4、60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
5、加入1800μl Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇)，颠倒混匀10次或剧烈震荡15-30秒。
6、冰浴5分钟。
7、正确连接负压装置，将连接管插到负压装置的插口上。
8、将吸附柱插入到连接管上。
9、将延伸管插入开盖的吸附柱中。
注意： 确保连接管、吸附柱和延伸管连接稳固，防止发生漏液。
10、将冰浴后的混合溶液全部加入延伸管中，开启并调节负压至-900～-800 mbar，缓慢吸走管中溶液。待溶液完全吸走，关闭负压开关，当压力恢复至0 mbar时，小心移去延伸管。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
12、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
13、向吸附柱中加入750μl无水乙醇，开启并调节负压至-800～-900 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
14、当压力恢复至0 mbar时，将吸附柱取下，置于新的收集管中，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
15、将吸附柱置于新的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-150μl Buffer EBL，室温放置3分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

附表1：不同血清/血浆样本量推荐加入试剂量

加入物	加入量(ml)
样本	1	2	3	4	5
蛋白酶K	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
Buffer CL	0.8	1.6	2.4	3.2	4
Buffer CB	1.8	3.6	5.4	7.2	9

储存条件：室温(15～30℃)。

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