WH0006 血凝块基因组DNA提取试剂盒（离

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特别提示：包括血凝块基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血凝块基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from blood clots
产品货号：WH0006
产品规格：50次

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有材料，、专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。简单快速，一小时内即可获得超纯的基因组DNA。常见得率（抗凝血样本）20-60μg/ml。

提取实例：

应用本试剂盒提取不同量的血凝块（液化后的使用量)，洗脱体积为100μl，提取后进行琼脂糖电泳，上样量为3μl，分子量标准D15000（WH0142)

试剂盒组成：

组分	50T
缓冲液GE	40ml
缓冲液GD	13 ml
漂洗液PW	15 ml
洗脱缓冲液TB	15 ml
Proteinase K	2×1 ml
吸附柱CB	10个
收集管（15 ml）	20个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

选配组分：RNase A（100mg/ml）（目录号：WH0217）；液化柱CX2（目录号：WH9002）

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2．若缓冲液GE中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
3．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
4．若提取血凝块样本，请自备血凝块液化柱CX2，目录号：WH9002。

使用方法：
次使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．向15 ml离心管加入200μl Proteinase K （20 mg/ml)溶液。
2．处理材料：
a．如果提取血液样本，直接加入0.5-3 ml血液样本，混匀。
b．如果提取血凝块样本，将一个血凝块液化柱CX2（选配组分，目录号：WH9002）放入上述装有Proteinase K溶液的15 ml离心管中，再向过滤柱加入0.5-3 ml血凝块样本，6000rpm（~8228×g）离心1 min。
  注意：也可以先将血液样本加到离心管中，或者先将处理后的血凝块样本离心收集到离心管中，再加入Proteinase K，但要保证彻底混匀。
3．向装有血液样本的离心管中加入2.4 ml缓冲液GE，振荡30 sec混匀。
  注意：若提取2-3 ml样本，可以增加缓冲液GE用量至3.6 ml。
  注意：如果需要去除RNA，可加入40 μl RNase A（100mg/ml）溶液（选配组分，目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。
4．65℃放置10min，每隔3 min振荡一次，以助裂解。简短离心以收集管盖内壁的水珠（如遇特殊样本，未能很好裂解，请适当延长孵育时间）。
5．向样本中加入2 ml无水乙醇，混匀，此时可能出现絮状沉淀。
  注意：若从水浴锅取出的样本温度过高，请在室温冷却后再加入无水乙醇。若提取2-3 ml血液样本，可以增加无水乙醇量至3 ml。
6．将上一步所得溶液和絮状沉淀的一半转移至一个吸附柱CB5中（吸附柱放入15 ml收集管中），3000rpm （~1850×g)离心3 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。
7．将步骤6剩余的溶液再转入同一个吸附柱中，重复步骤6操作。
8．向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），5000rpm（~4500×g)离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。
9．向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），5000rpm（~4500×g)离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB5放回收集管中。
10．向吸附柱CB5中加入2 ml缓冲液PW，5000rpm （~4500×g)离心15 min，丢弃收集管，将吸附柱CB5放到一个新的15 ml离心管中。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验，此步骤目的是将剩余的乙醇清除。
11．向吸附膜的中间部位悬空滴加300 μl洗脱缓冲液TB，室温放置5 min，5000rpm（~4500×g)离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于200μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB5中，室温放置2 min，5000rpm（~4500×g)离心2 min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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名称：白细胞裂解液
货号：BTN130989
规格：250mL
本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。
2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。
3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。
4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。
5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。
6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。
7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。
8.在上清液中加入等体积的自备的lǜ仿，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。
10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。
11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。

名称：柱式血清血浆DNA提取试剂盒
货号：BTN130979
规格：50次

名称：柱式血液DNA提取试剂盒
货号：BTN60306
规格：50次
本试剂盒是基于离心柱/硅胶膜原理的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的试剂。

产品特点：
1. DNA纯净，OD260/280在1.8-2.0之间。不含蛋白质和RNA污染，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2.产量高，一般为1-10μg/mL全血(对哺乳动物血液)。
3. 操作简单，整个过程约20分钟，全室温操作，适合大规模样品处理。
4. 用量广泛，每次可以处理少达20μl(对禽类动物血液)，多达1mL的血液(对哺乳动物血液)。
5. 安全，本试剂盒对人体，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

成分	规格
红细胞裂解液(A型)	25ml
溶液A	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.02-1mL新鲜或抗凝血液(冷冻血需先37℃水浴融化)中加入0.5mL红细胞裂解液(A型)，吹打混匀。
a)哺乳动物，血液使用量以300μl以下为宜，使用量越大产量越高，但产率会降低。如果血液多于300μl，重复1-2步两次可以提高产率。
b)禽类动物，血液使用量以20μl以下为宜，可以从第3步做起。
2.室温12000～15000rpm离心5分钟，沉淀呈粉红色，小心倾去上清。
3. 再短暂离心半分钟，吸弃残留的液体。此步有利于后面的细胞裂解，但一般可以省略。
4. 向有沉淀的离心管内加入0.5mL溶液A(溶液A有少量晶体沉淀，用前需要摇晃均匀)，用移液枪吹打使沉淀充分悬浮起来。此步目的是裂解细胞，释放DNA，所以吹打越充分越好。
5. 静置2分钟待溶液变清亮后，将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟，以使DNA与膜充分结合。
6. 12000rpm离心半分钟，DNA将吸附到膜上，弃收集管中的废液。
7. 加入0.7mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。
8. 加入0.3mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。
9. 12000rpm离心半分钟，甩干残留液体。此步很重要，以去除膜上残留通用洗柱液，否则会影响后续反应。
10. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入适量50μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA洗脱液2.0在65℃预热后再使用，洗脱DNA的效果会更好。
11. 12000rpm离心半分钟，离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。

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WE0185	血块基因组DNA提取试剂盒	50次
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MT0012	病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)	50T

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