SV0435 Hpy99I限制性内切酶

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特别提示：包括Hpy99I限制性内切酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Hpy99I限制性内切酶
英文名称：Hpy99I Restriction Endonuclease
产品货号：SV0435
产品规格：500U|100U

在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 50%
BalbBuffer 2.1: 10%
BalbBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer:
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
2,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
建议温育时间不＞4 小时。

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货号	名称	规格
WE0212	蛋白酶K	100mg
SV0073	AvaII限制性内切酶	10KU|10KU|2KU|1KU
SV0218	BspQI限制性内切酶	2500U|500U
SV0577	PacI限制性内切酶	1250U|250U|125U
SV0588	PflMI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0765	Tth111I限制性内切酶	2KU|400U|200U
SV0773	XbaI RE-Mix限制性内切酶	150次

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名称：T4聚核苷酸激酶
货号：BTN120506
规格：250U
T4聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。本产品还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：


产品用途：
1．DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2．寡核苷酸5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3．除去3′磷酸基团。

产品组成：

成分	规格
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	25μl
10×反应缓冲液	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1 单位指在37℃条件下，30分钟内催化 1nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。

1×反应缓冲液：[70mM Tris-HCl(pH7.6@25℃)，10mM MgCl2，5mM DTT]，37℃温育。

热失活：65℃加热20分钟。

来源：重组E.coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶或修饰的T4多聚核苷酸激酶基因。

自备试剂：0.5M EDTA(pH8.0)、[γ-32P或γ-33P]-ATP或0.1mM ATP、DNA纯化试剂盒。

使用方法：

一、DNA 5′末端标记：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的[γ-32P或γ-33P]-ATP(3000Ci/mmol)	50pmol
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶,10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚氯fǎng抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。

二、DNA 5′末端磷酸化：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的0.1mM ATP	3μL
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚氯fǎng抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。

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