ALH042 骨RNA提取试剂盒

骨RNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科学研究，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多骨RNA提取试剂盒等RNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括骨RNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：骨RNA提取试剂盒
英文名称：Bone tissue RNA Extraction Kit
产品货号：ALH042
产品规格：50次

本试剂盒适用于快速提取骨组织细胞总RNA，骨组织坚硬、骨细胞密度低、而且外周基质含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA难以分离，无法用传统Trizol法进行高质量提取。本试剂盒采用独特的不含苯酚/lǜ仿配方的裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖。同时独特基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，离心沉淀去除多糖和次级代谢产物，然后裂解混合物用乙醇调节RNA结合吸附到基因组DNA清除柱，然后RNA被选择性洗脱滤过， 吸附在基因组DNA清除柱上的残留DNA无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， zuì后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的苯酚，lǜ仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.简捷，单个样品操作一般可在35分钟内完成，上zuì简单快速的试剂盒。
3.独特研发成功基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4.适应性广泛，可以提取各种骨组织包括矿化骨组织。
5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.2，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot，二代测序和各种实验。

试剂盒组份：

组份	50次
裂解液CLB	50ml
Plantbalb	5ml
裂解液RLT Plus	25ml
去蛋白液RW1	40ml
漂洗液RW	10ml
RNase-free H2O	10ml
吸附柱和收集管	50套
基因组DNA 清除柱和收集管	50套

注意事项：
1. 所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 需要自备乙醇，研钵或者其它合适的破碎骨组织装置。
3. 样品处理量不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
4. 裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到无残留），本试剂盒RNA 提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，大多数DNA 已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup) ，请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱上进行DNase I柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒前可先索取具体操作说明书。

储存条件：室温，有效期12个月

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货号	名称	规格
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名称：昆虫RNA柱式提取试剂盒
货号：BTN81220
规格：50次
本试剂盒是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品(尤其是昆虫样品)中提取总RNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3.适用于各种昆虫组织，每100mg组织能提取到20-30μg 总RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.一站式，提供RNase-free的样品收集管。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(RNA洗脱液zuì好4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 将50-300mg昆虫组织放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备lǜ仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000 rmp离心3～5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
11.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 12000 rmp室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。注意：大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段，彼此用氢键相连，所以在甲醛变性胶中，没有28S带出现(文献见：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7)
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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