MT0026 高特异性热启动Taq DNA聚合

高特异性热启动Taq DNA聚合由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，我公司专注于核酸扩增(PCR)产品的研发、生产和供应，为您提供的高特异性热启动Taq DNA聚合质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括高特异性热启动Taq DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高特异性热启动Taq DNA聚合酶
英文名称：Top HotStart Taq DNA Polymerase
产品货号：MT0026
产品规格：250U|2500U

本品为化学修饰的热启动Taq DNA 聚合酶，独特的封闭技术使得该酶在50℃以下无活性，仅通过95℃加热15分钟后才能完全恢复活性，从而启动PCR扩增，提高PCR扩增的特异性，降低引物二聚体、非特异性条带的扩增、提高特异性PCR产物的产量。该热启动Taq酶具有5"-3"外切酶活性，可用作TaqMan探针的定量PCR。同时该酶扩增的PCR产物具有“A”尾巴，可直接用于TA克隆。以λDNA为模板，可以很好的扩增10 Kb的DNA片段；以人类基因组DNA为模板,可以很好的扩增4 Kb的DNA片段。本品常用于PCR扩增、TaqMan探针的定量PCR、DNA测序等。

产品特点：
1．化学法修饰热启动酶，热启动；
2．高特异性，有效抑制非特异性扩增；
3．无外源性核酸污染，纯度高达99.9%。

产品组成：

组分	250U	2500U
Top HotStart Taq DNA Polymerase(5 U/μl)	50μl	500μl
*10×Top HotStart PCR Buffer	1ml	5ml

*10×Top HotStart PCR Buffer含25mM Mg2+，通常不再需要额外添加Mg2+即可获得良好的扩增结果。

保存条件：-20℃保存，有效期2年。

单位定义：一个活力单位即在在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

反应实例：

图：应用不同公司的热启动Taq DNA 聚合酶扩增鸡PPAR基因片段（522bp，72％GC含量）。
M: DNA Marker 2000；
泳道1-2: Top HotStart Taq；
泳道3-4: T公司抗体封闭法 HotStart Taq；
泳道5-6:普通Taq酶。

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货号	名称	规格
YT381	PCR试剂盒(含YT Taq酶，Buffer，dNTP，上样液)	400次
YT382	PCR Master Mix (含蓝色电泳染料)	400次|2000次|10000次
WE0110	2×Babuddy MasterMix(含染料)	1ml|5ml
WE0125	高保真多重PCR Mix(下一代测序用)	1ml|5ml
WE0145	实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料)	5ml
ALH223	Pfu DNA聚合酶	500U|3000U

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名称：可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂
货号：BTN60901
规格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是进行PCR的zuì常用工具酶，但是由于它在常温下还是具有部分活性，所以经常会出现非特异的扩增产物，尤其是当PCR反应体系中有大量非特异DNA存在的时候。目前zuì常见的解决方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗体和使用经过化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺点是加热后抗体会不可逆失活，后者的缺点是需要预热处理使酶激活。

产品特点：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常温抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能丧失，当温度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢复。
2. 耐热，产品本身为非蛋白质试剂，远比Anti-Taq抗体稳定，便于保存和运输。
3. 使用简单，在加Taq酶前将本产品按PCR反应体积的1/10直接加入即可。
4.适用范围广，除Taq DNA聚合酶外，还可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一种酶的抗体一般对另一种酶的活性没有抑制作用。
5.与后续的RT-PCR兼容。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反应终体积1/10的比例将本产品加入到反应体系中混匀，然后再加入DNA聚合酶，启动PCR反应。

名称：即用型PCR试剂盒(含染料)
货号：BTN90805
规格：1ml×10|5mL×20
本产品内含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。

产品特点：
1.扩增效率和灵敏度更高。
2. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
3.快捷，操作步骤已经zuì大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
4.产物可直接用于T载体克隆，不需要额外的加A反应。
5.染料单独提供，方便客户组合。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以30μL的标准PCR反应体系为例)
在一干净的PCR管中，加入下列成分：

试剂		加入量
PCR MagicMix		15μl
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500pg
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10pmol each
补水到		30μL

放入PCR仪中进行PCR,结束后取5-10μL直接上样电泳，按照1.0mL PCR MagicMix加入40μL专用染料的比例将40μL专用染料加入到1mL PCR MagicMix中
注意：
1．如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果DNA模板中有PCR不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物)，可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804，30μL体系中加3uL)，可能会对PCR有帮助。

PCR反应的影响因素
变性温度与时间：模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20~30秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热DNA聚合酶的活力，zuì高变性温度不宜超过95℃。
退火温度与时间：退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45~68℃之间。设置特定反应的zuì适退火温度，可根据引物的(G+C)%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30~60秒，足以使引物与模板之间完全结合，长时间退火没有必要。
延伸温度与时间：PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间，延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增2 Kb片段，若使用Taq酶只需1分钟，使用Pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现，时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：可根据模板DNA的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设定20-40个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：50μl反应体系可用0.5-5 U酶，酶量的选择与模板DNA的量，扩增片段大小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。
模板：模板可以是单链DNA，也可以是双链DNA，质粒DNA的扩增效率略低于线状DNA。模板加量一般不需太多，不超过1μg为宜，因为加量过多可能导致非特异性扩增增加，但是要考虑模板中靶序列的含量。例如，使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列，就需要适当加大模板用量。
引物：引物与模板配对的长度应至少为17个核苷酸，zuì高不宜超过30个核苷酸，zuì佳长度为20~24个核苷酸，如需插入酶切位点，应在酶切位点5′端多加几个碱基，有利于酶切。引物的(G+C)%含量组成应均匀，尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(G+C)%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显的次级结构，如发夹结构。两个引物之间不应发生互补，特别是在引物3′端。如果可能，引物3′端zuì好富有GC，这样退火后有利于引物3′端的延伸。人工合成的引物zuì好经过色谱层析纯化或PAGE纯化，以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终浓度一般为0.1-2μm左右，浓度太高会导致非特异性扩增，太低则扩增产物太少。

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