MT0102 CCK8细胞增殖与毒性检测试剂

CCK8细胞增殖与毒性检测试剂是高品质的工具酶产品，由北京百奥莱博供应，本产品仅用于生物化学研究方面，我公司专注于工具酶产品的研发、生产和供应，为您提供的CCK8细胞增殖与毒性检测试剂质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括CCK8细胞增殖与毒性检测试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：CCK8细胞增殖与毒性检测试剂
英文名称：CCK8 cell proliferation and toxicity test reagents
产品货号：MT0102
产品规格：100次(1ml)|500次(1ml×5)

本制品是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的试剂，因其操作简单快速、高灵敏度且细胞毒性低等成为替代MTT法检测细胞生长密度的zuì好方法。该试剂盒利用水溶性四唑盐-WST-8在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。本制品广泛应用于细胞增殖测定、细胞毒性测定、药物筛选、肿瘤药敏试验等。

产品特点：
·灵敏度高，数据重复性好；
·操作简单，安全性高；
·细胞毒性低，无需放射性同位素；
·单一组分，无需配制。

应用实例：

接种96孔板293T细胞，每孔加入10μl CCK-8溶液，混合均匀，在37℃，5% CO2培养箱中培养，酶标仪读取不同培养时间的OD值，做标准曲线。

操作方法：

一、细胞计数测定
1．96孔培养板中贴壁或悬浮细胞100μl/孔培养体积(>2000个细胞/孔)。
2．向每孔加入10μl的CCK- 8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液。
  注意：加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液，但没有加入细胞的孔作为空白对照。
3．将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4．用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5．如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 1% w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮盖培养板避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。

二、细胞增殖实验和细胞毒性检测
1．96孔培养板中贴壁或悬浮细胞100μl/孔培养体积(＞5000个细胞/孔)。
2．向培养板加入10μl不同浓度的待测药物。
3．将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如:6,12,24或48小时)。
4．向每孔加入10μl CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。
5．将培养板在培养箱内孵育1～4小时。
6．用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7．如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 1%w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮盖培养板避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、制作标准曲线（需要测定细胞数量时)
1．先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2．按比例(例如1:2的比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3～5个细胞浓度梯度，每组3～6个复孔。
3．接种后培养使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定O.D值，制作出一条以细胞数量为X轴，O.D值为Y轴的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致)。

注意事项：
1．接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基或PBS，而不作为指标检测孔。
2．本制品的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
3．用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
4．培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间或增加细胞数量（~10⁵个细胞/孔)。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于悬浮细胞，在培养1～4小时后，可先从培养箱中取出，目察染色程度或用酶标仪测定决定。若染色困难，可将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。 染色的zuì佳时间可定为悬浮细胞的zuì佳培养时间。对于贴壁细胞，培养时间一般为1～4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察染色程度（根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。
5．若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加CCK-8试剂。

保存条件：-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反复冻融会增加背景值。

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名称：DNase I溶液
货号：BTN130984
规格：1.5mL
本产品是DNase I的10mg/mL的溶液，酶活性为1500-2500U/mg。DNase I从牛胰腺纯化得到是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶，分子量约32kDa(单体)。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5´端为磷酸基团，3´端为羟基。其活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。

产品特点：
1．即开即用，不需要用户单独配置。
2．可用于制备RNase-free的DNase。本产品为粗制品，可能含残留的RNase，不能直接用于清除RNA样品中的DNA。
3．本产品可直接用于DNase I Footprinting实验、缺口平移(Nick Translation)、制备DNA随机片断文库、制备TUNEL检测中的阳性对照。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
本产品可用于DNase I Footprinting实验、缺口平移(Nick Translation)、制备DNA随机片断文库、TUNEL检测中剪切基因组DNA作为阳性对照。具体使用方法请参考相关资料。

注意：本产品浓度较高，如需对其进行稀释，需要自备DNase I储存液。

DNase I储存液的配方：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl₂，50%(v/v)甘油。

附录：
1．DNase I活性定义：37℃10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
2．DNase I活性检测条件：40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl2，1μg of pBR322 DNA。
3．纯度：不含其它DNA内切酶和外切酶。
4．DNase I酶储存溶液：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v)甘油。
5．DNase I酶反应液(10×)：100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl2，1mM CaCl2。
6．失活或抑制：加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯fǎng抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子、0.1%的SDS、DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。

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