MQ0021 Stable化学感受态细胞

Stable化学感受态细胞由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，Stable化学感受态细胞是我司众多优质克隆与表达之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括Stable化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Stable化学感受态细胞
英文名称：Stable Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0021
产品规格：10×100μl/50×100μl

Stable菌株是高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有与Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表现出比Stbl2，Stbl3更优异的性能，特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA片段的克隆。基因组含有重组酶recA1 rel A1突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；同时含有核酸酶endA1突变，避免了提取质粒过程中核酸酶的污染，大大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。lacZΔM15的存在使Stable可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素和链霉素抗性，Stable感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F"proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10(TetR)∆(ara-leu)7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL(StrR)rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)
操作说明：
1.Stable感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，6分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置5分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4.37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟)
5.5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.或LB培养基上。
6.将平板倒置放于37℃或30℃培养箱过夜培养。(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜)。
优点及应用：
1.Stable菌株与Stbl3相比，基因组含有endA突变，提高了病毒质粒的产量和纯度。
2.Stable菌株比Stbl3生长速度快，倍增时间是Stbl3的1.5倍。
3.Stable菌株基因组中含有fhuA突变，赋予其对噬菌体T1的抗性。
4.Stable菌株具有较高的转化效率，pUC19检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
5.Stable菌株基因组中含有lacZΔM15，可用于蓝白斑筛选实验。
6.Stable菌株特别适合于不稳定DNA片段的克隆，及逆转录病毒/慢病毒载体的构建和扩繁。
注意事项：
1.对不稳定DNA片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后平板应在30℃培养，以减少发生错误重组的概率。
2.制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后使用。
3.对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存，尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。
4.感受态细胞zuì好在冰中缓慢融化。插入冰中10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。
5.转化高浓度的质粒或率的连接产物可相应减少zuì终用于涂板的菌量。

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名称：大肠杆菌DH5α化学感受态细胞
货号：BTN81024
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率不低于107，适用于的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
 本菌种来源于Hoffman-Berling 1100菌种。

基因型	表现型
deo R	组成型合成脱氧核糖
end A1	核酸内切酶I缺失
gyr A96	具有萘啶酮酸抗性
hsd R17	限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169	lac基因缺失
rec A1	DNA重组活性降低
Rel A1	允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sup E44	抑制琥珀突变突变，为某些噬菌体必需
thi-1	不能自身合成硫氨
φ80(lac ZΔM15)	提供α-互补所需的ω片断

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入800μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm(小于225rpm)振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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