RFT192 磷酸酶抑制剂混合物(100×)

磷酸酶抑制剂混合物(100×)的品牌是百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，本制品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多磷酸酶抑制剂混合物(100×)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括磷酸酶抑制剂混合物(100×)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：磷酸酶抑制剂混合物(100×)
英文名称：Phosphatase inhibitor cocktail
产品货号：RFT192
产品规格：1ml|5×1ml

本品是一种用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶抑制剂混合物(Imidazole，Sodium fluoride, Sodium tartrate dihydrate, Sodium molybdate，β-glycerophosphate and Sodium orthovanadate in H2O)，可广泛抑制蛋白提取物中的酸性、碱性、丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸酶。一个包装的本产品通常足够用于100ml的裂解液的配制。

细胞或组织等提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。本磷酸酶抑制剂混合物可以有效抑制常见磷酸酶对于蛋白的去磷酸化作用，保持蛋白原有的磷酸化状态。氟化钠是酸性磷酸酶可逆抑制剂；咪唑是碱性磷酸酶抑制剂；β-甘油磷酸是丝氨酸/苏氨酸磷酸酶可逆抑制剂；正钒酸钠是碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶可逆抑制剂；酒石酸钠是酸性磷酸酶抑制剂。

本产品为经优化和测试的用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物蛋白提取的磷酸酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例把磷酸酶抑制剂混合物加入裂解液中即可用于样品蛋白的提取，并有效抑制蛋白的去磷酸化。

使用方法：

1、使用前常温溶解磷酸酶抑制剂混合物 (100×)，混匀，按照1:100 比例加入到组织细胞裂解物中，如1 ml裂解物中加入10μl抑制剂混合物。磷酸酶含量特别丰富的组织，可以适当提高加入量，使其终浓度为2～3×。含有磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。根据需要，可以同时考虑添加适当的蛋白酶抑制剂混合物。
2、待所需的抑制剂添加完毕并混匀后，就可以开始进行样品的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

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名称：糖蛋白染色试剂盒
货号：BTN131075
规格：10次
本产品为在SDS-PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。该方法使用三种试剂，所需时间仅需不到两小时，而其他的染色方法需要四到五小时。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。

产品特点：
1．包括一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白。
2．简洁、易储存的试剂盒。
3．本产品足够10张mini-PAGE胶或20张8×8cm蛋白免疫印记硝酸纤维素膜染色。

产品组成：

成分	规格
氧化试剂	2.5g
糖蛋白染色试剂	250ml
还原试剂	1.25g
阳性对照(辣根过氧化物酶)	1mg
阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)	1mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂：0.9%NaCl溶液或PBS缓冲液、BCA工作液。

使用方法：

实验前准备
1．配制3%乙酸溶液：将30mL冰醋酸与970mL超纯水混匀，室温保存备用。
2．配制50%甲醇溶液：将250mL甲醇与250mL超纯水混匀，室温保存备用。
3．配制氧化试剂：向氧化试剂干粉中加入250mL的3%乙酸溶液，充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，室温保存备用。
4．配制还原试剂：向还原试剂干粉中加入250mL的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，室温保存备用。
5．配制阳性对照(辣根过氧化物酶)：向1mg固体中加入0.5mL超纯水，使得溶液浓度为2mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1mg/mL。对于80mm×80mm的凝胶来说，每个泳道加5到10μl的阳性对照。将配制好的阳性对照分装后-20℃保存。
6．配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)：向1mg固体中加入0.5mL超纯水，使得溶液浓度为2mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1mg/mL。对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每个泳道加5到10μl的阴性对照。将配制好的阴性对照分装后-20℃保存。
7．样品稀释：用SDS-PAGE上样缓冲液将样品浓度稀释为1mg/mL，对于80mm×80mm的凝胶来说，每个泳道加5到10μl的样品。

凝胶染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)
1．取出电泳后的SDS-PAGE凝胶，加入到100mL 50%甲醇溶液中，完全浸泡30分钟后，倒出甲醇溶液。
2．用100mL 3%乙酸溶液洗涤胶块两次，每次轻轻振荡10分钟。
 注：如有需要，此步的胶块可在超纯水中4℃过夜处理。
3．将胶块转移到25mL氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。
4．用100mL 3%乙酸溶液洗涤胶块3次，每次轻轻振荡5分钟。
5．将胶块转移到25mL糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。
 注：若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。
6．将胶块转移到25mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。
7．用3%乙酸溶液洗涤胶块，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%乙酸溶液中。

硝化纤维素膜染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)
1．用20mL 3%乙酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡10分钟。
2．将膜转移到10mL的氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。
3．用10mL 3%乙酸溶液洗涤膜3次，每次轻轻振荡5分钟。
4．将膜转移到10mL的糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。(注：若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。)
5．将膜转移到10mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。
6．用3%乙酸溶液洗涤膜，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%乙酸溶液中。

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