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产品详情

QN0931 一步法逆转录试剂盒

  • 产品/服务:QN0931 一步法逆转录试剂盒
  • 型 号:QN0931
  • 品 牌:百奥莱博
  • 单 价:面议 
  • 更新日期:2023-06-01
  • 有效期至:长期有效
  • 浏览次数:1035
产品简介

北京百奥莱博供应的一步法逆转录试剂盒用于科研目的,一步法逆转录试剂盒是我司众多优质核酸扩增(PCR)之一,质量堪比同类进口产品,价格非常优惠,目前正热烈促销中,恭候您的咨询订购。...

产品详细介绍

特别提示:包括一步法逆转录试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


产品名称:一步法逆转录试剂盒
英文名称:One Step RT-PCR Kit
产品货号:QN0931
产品规格:50T|200T

本品是一步法RT-PCR反应的专用试剂,反应过程在同一管内连续进行,避免开管,能有效防止污染。本品含有高温反转录酶(RNase H-)和热启动酶,采用优化配方的专用Buffer,具有更高的反转录和PCR扩增效率,适合于低浓度RNA模板的高灵敏度扩增。

试剂盒组份:
25×One Step RTase mix
5×One Step RT Mix Buffer

本品先采用反转录酶以RNA为模板合成 cDNA,然后再以合成的cDNA为模板,经过PCR扩增反应的热变性、引物退火、链延伸三个步骤循环往复,在短时间内扩增得到大量DNA片段,扩增得到的目的产物3’末端含有一个A碱基,可直接用于T/A克隆。

技术说明:
1、 该体系常用50℃进行反转录反应,可以在45℃~60℃范围内进行反转录温度优化;根据反应特征不同,可以在10~30分钟内对反转录时间进行优化;
2、 该体系所用的反转录酶是在MMLV基础上进行了基因改造,去除了RNaseH活性,使其具有更高的温度耐受性和反转录温度,对RNA复杂结构模板具有更高的反转录效率;
3、 该体系具有更好的体系稳定性和适用性,非常适合于病毒、组织等样本提取RNA复杂模板的检测。

储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。

根据您的关注的一步法逆转录试剂盒,一步法逆转录试剂盒,QN0931,百奥莱博,,,您可能还对以下产品有需求:

货号 名称 规格
BTN130985 免DNA提取PCR试剂盒(细胞组织裂解物直接PCR试剂盒) 100次
BTN131227 10nt随机引物(0.5μg/uL) 250
BTN130957 免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒) 100次
YT382 PCR Master Mix (含蓝色电泳染料) 400次|2000次|10000次
WE0141 快速实时荧光定量PCR预混体系 5ml
SY0024 常规Taq DNA聚合酶 1000U


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名称:taq酶抗体
货号:BTN130815
规格:500U
Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体,其与Taq酶结合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时,高温变性前抗Taq抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性,能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应zuì初的DNA变性步骤中变性,DNA聚合酶活性恢复,达到Hot Start PCR效果。使用本制品无需特殊的抗Taq抗体失活处理,可以在常规PCR反应条件下使用。其工作原理如下:
taq酶抗体工作原理

储存条件:低温运输,-20℃保存、有效期一年。

活性定义:Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合,25℃,10 min温浴后,在55℃,10 min条件下抑制90%以上的1U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。

纯度:
1. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA-Hind III在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 10 U的Taq Antibody和1μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 10 U的Taq Antibody和1μg的λDNA在37℃或70℃下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
4. 10 U的Taq Antibody和1μg的16S,23S rRNA在37℃或70℃下反应1小时,RNA的电泳谱带不发生变化。
5. 35Cycles的PCR反应条件下,无Mouse Genomic DNA的污染。

名称:cDNA链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)
货号:BTN60906
规格:50次
本试剂盒提供合成cDNA链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)合成mRNA的全长cDNA拷贝。

产品特点:
1. 使用突变的反转录酶,内源RNase H活性低。
2. zuì长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

试剂盒组成:
成分 规格
MMLV(含RI) 100μl
RT Buffer(含dNTP) 300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL) 50μl
Random Primer(0.2μg/μL) 50μl
RNase-free水 1ml
说明书 1份


储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:

一:合成PCR用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:
RNA 模板
总RNA 100-500ng
或poly(A)mRNA 10-500ng
或专一的RNA 0.01pg-500ng
注意:RNA样品不能含有基因组DNA污染。

引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL) 1μl
或随机引物(0.2μg/μL) 1μl
或RNA 模板专一性引物 15-20 pmol
注意:随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
RNase-free水 补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用,不需要纯化。

二:合成建文库用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:
RNA模板
poly(A)mRNA 1μg
或专一的RNA 0.5-1μg
注意:RNA样品不能含有基因组DNA污染。
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL) 1μl
或随机引物(0.2μg/μL) 1μl
或RNA模板专一性引物 100 pmol
注意:随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
RNase-free水 补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

三:用对照模板合成cDNA(需要用同位素,需要对照的客户需要单独跟我司联系)
1. 按下表配制RT反应体系:
对照RNA模板(0.5μg/μL) 2μl
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL) 1μl
或随机引物(0.2μg/μL) 1μl
或对照专用引物 2μl
RNase-free水 补水到13μl

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上,电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

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